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复荣通脉胶囊(批准文号:冀药制字Z20070041)是河北省沧州中西医结合医院院内的益气养阴、活血通络类中药复方制剂,临床用于治疗气阴两虚、瘀血阻络型糖尿病周围血管病变及周围神经病变。在临床应用过程依据其药物组成及治疗原则,曾试用于糖尿病肾病,效果显著。本课题从实验方面研究复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠肾脏血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达影响,探讨其治疗糖尿病肾病的作用机理,为临床应用提供理论依据,进而从抑制PDGF-BB和调节MMP-9表达方面了解益气养阴活血通络类中药治疗糖尿病肾病的作用。目的:复制糖尿病大鼠模型,观察复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠肾脏PDGF-BB和MMP-9表达的影响,探讨复荣通脉胶囊治疗糖尿病肾病的机理,为临床上中医药治疗糖尿病肾病提供可靠的试验依据。方法:Wistar大鼠(成年健康雄性,n=60),随机分为正常对照组大鼠(NC组,n=10)和造模组大鼠50只。造模组大鼠禁食12小时后,腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)60mg/kg(STZ临用前用0.1M柠檬酸钠缓冲液配成浓度为1%、p H=4.2的溶液)建立糖尿病大鼠模型,NC腹腔注射等量的柠檬酸钠缓冲液。72小时后取尾静脉血测末梢血糖,血糖值≥16.7mmol/L即确定为糖尿病大鼠。造模成功后大鼠随机抽取40只,分为糖尿病模型组(DM,n=10)、复荣通脉胶囊低剂量治疗组(FRL,n=10)、复荣通脉胶囊中剂量治疗组(FRM,n=10)、复荣通脉胶囊高剂量治疗组(FRH,n=10)。成模后一周,按人体-大鼠体表面积比值表换算出大鼠的等效剂量,为复荣通脉中剂量组给予1.4g/(kg·d)灌胃、复荣通脉低剂量组给予0.7g/(kg·d)灌胃、复荣通脉高剂量组给予2.8g/(kg·d)灌胃,其余两组每日给予同等剂量生理盐水灌胃,每日灌胃1次,连续8周。实验期间大鼠喂标准饲料,自由进食水。灌胃治疗8周后禁食12h,尾静脉取血测血糖,以3%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,腹部正中切口,腹主动脉采血,收集血标本。取血后摘取大鼠的肾脏,去除肾包膜及肾门结缔组织并用生理盐水冲洗后称重,将肾脏切割成小于0.5cm×0.5cm×0.1cm的组织块,置于4%中性福尔马林溶液中固定,HE染色在光镜下观察肾小球及肾小管间质的形态学变化,SP法免疫组化观察病理切片组织中阳性染色面积及强度。所有数据用SPSS 16.0软件统计处理,检验水准α=0.05。计量资料数据以——X±SD表示,组内治疗前后比较采用配对t检验,各组间比较采用单因素方差分析,方差不齐时应用多个独立样本比较的Kruskal-Wallis H检验。结果:1对大鼠一般状态的影响正常组大鼠精神状态良好,眼睛有神,反应敏捷,毛发明亮有光泽,体型健壮,饮食水量增加,尿量及大便性状正常。糖尿病组和复荣通脉胶囊低、中、高剂量组大鼠精神萎靡,反应迟钝,毛色晦暗无光泽,抱团少动,体形瘦小,饮水量明显增多,尿量增多。2对体重的影响造模前和治疗前各组大鼠的体重相比无差异(P>0.05);经灌胃治疗8周后,与NC组相比,DM组及FRL、FRM、FRH组体重明显降低(P<0.05),DM组及FRL、FRM、FRH组间体重比较无差异(P>0.05);NC组大鼠8周后体重比8周前明显增加(P<0.05),DM组及FRL、FRM、FRH组间大鼠治疗后体重比治疗前明显降低(P<0.05)。3对右肾重/体重比的影响经灌胃治疗8周后,与NC组比较,DM组及FRL组、FRM组、FRH组肾重/体重比明显升高(P<0.05);与DM组比较,FRL组肾重/体重比无明显差异(P>0.05),FRM组、FRH组肾重/体重比明显降低(P<0.05);与FRL组比较,FRM组、FRH组肾重/体重明显降低(P<0.05);FRM组和FRH组比较肾重/体重比无明显差别(P>0.05)。4对生化指标的影响4.1对血糖的影响造模前各组大鼠的血糖相比无差异(P>0.05);治疗前,与NC组相比,DM组及FRL、FRM、FRH组大鼠血糖均显著升高(P<0.05),而DM组及FRL、FRM、FRH组间血糖比较无差异(P>0.05)。经灌胃治疗8周后,与NC组相比,DM组及FRL、FRM、FRH组大鼠血糖,均显著升高(P<0.05),而DM组及FRL、FRM、FRH组大鼠血糖比较无差异(P>0.05);各组大鼠血糖与治疗前相比无明显差异(P>0.05)。4.2对血脂的影响灌胃治疗8周后,与NC组相比,DM组及FRL、FRM、FRH组TG、TC水平明显升高(P<0.05);DM组、FRL组、FRM组及FRH组组间比较TG、TC水平无明显差异(P>0.05)。4.3对肾功能的影响灌胃治疗8周后,与NC组相比,DM组及FRL、FRM、FRH组Scr、BUN水平明显升高(P<0.05);与DM组比较,FRL组Scr、BUN水平无明显差异(P>0.05),FRM、FRH组Scr、BUN水平下降明显(P<0.05);与FRL组比较,FRM、FRH组Scr、BUN水平明显降低(P<0.05);FRM、FRH组间比较,Scr、BUN水平无明显差异(P>0.05)。4.4对CRP的影响灌胃治疗8周后,与NC组相比,DM组及FRL、FRM、FRH组CRP水平明显升高(P<0.05);与DM组比较,FRL组CRP水平无明显差异(P>0.05),FRM、FRH组CRP水平明显降低(P<0.05);与FRL组比较,FRM、FRH组CRP水平明显降低(P<0.05)。FRM、FRH组间比较,CRP水平无明显差异(P>0.05)。5对肾脏组织形态学的影响光镜下显示,正常组大鼠肾脏肾小球、肾小管结构正常,肾间质无炎性细胞浸润,血管无扩张充血;糖尿病模型组肾脏结构发生改变,如肾小球内皮细胞肿胀、系膜细胞增多,肾小管上皮肿胀,肾间质有炎细胞浸润,血管扩张充血。复荣通脉胶囊低剂量组肾小球系膜细胞及基质轻度弥漫性增生,局灶节段性加重,内皮细胞增生、肿胀,基底膜空泡变性;肾小管上皮空泡及颗粒变性,灶状萎缩,肾间质灶状淋巴单核细，灶状纤维化,小动脉管壁轻度增厚,与模型组比较无明显变化;复荣通脉胶囊中、高剂量组肾小球系膜细胞及基质轻度节段性增生,上皮细胞未见著变;肾小管上皮空泡及颗粒变性,未见萎缩,肾间质小灶淋巴单核细胞浸润,未见纤维化,小动脉管壁未见增厚,但中、高剂量组间比较无明显差异。6对大鼠肾脏PDGF-BB和MMP-9的影响6.1 PDGF-BB在正常大鼠肾脏有少量表达,与NC组比较,DM组及FRL、FRM、FRH组PDGF-BB表达明显升高(P<0.05);与DM组比较,FRL组PDGF-BB表达无明显差异(P>0.05),FRM、FRH组PDGF-BB表达明显降低(P<0.05);与FRL组比较,FRM、FRH组PDGF-BB表达明显降低(P<0.05);FRM、FRH组比较PDGF-BB表达无明显差异(P>0.05)。6.2 MMP-9在正常大鼠肾脏正常表达,与NC组比较,DM组及FRL、FRM、FRH组MMP-9表达明显降低(P<0.05);与DM组比较,FRL组MMP-9表达无明显差异(P>0.05),FRM、FRH组MMP-9表达明显升高(P<0.05);与FRL组比较,FRM、FRH组MMP-9表达明显升高(P<0.05);FRM、FRH组间比较,MMP-9表达无明显差异(P>0.05)。结论:1复荣通脉胶囊对糖脂代谢无影响。2本实验复制的糖尿病大鼠模型8周后肾重/体重比、Scr、BUN明显升高,肾损害存在明确,且血清CRP明显升高,PDGF-BB表达升高,肾脏MMP-9表达降低。经复荣通脉胶囊治疗8周后肾重/体重比下降,Scr、BUN明显下降,肾损害减轻,表明复荣通脉胶囊具有减轻糖尿病大鼠肾脏的肥大、降低尿素氮和肌酐的作用,还能抑制血清CRP的升高,能抑制PDGF-BB表达的升高,能抑制肾脏MMP-9表达的下降,通过以上机制延缓糖尿病大鼠的肾脏损害。3本实验表明复荣通脉胶囊对糖尿病肾病有治疗作用,但低剂量治疗组与中、高剂量治疗结果组间的差别明显,有统计学意义,而复荣通脉胶囊中、高剂量治疗结果组间无明显差异,无统计学差异,说明复荣通脉胶囊的临床应用存在剂量依赖性,但是为非线性关系,综合经济成本的角度考量,中剂量为临床上合适的治疗剂量。