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目的:辽宁省名中医卢秉久教授擅长治疗非酒精性脂肪性肝炎,根据其临床经验确立“活血祛湿”治疗思想,根据该思想确立自拟活血祛湿方。动物实验旨在探讨自拟活血祛湿方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型的疗效以及机制;临床试验旨在探讨自拟活血祛湿方的疗效以及安全性。材料与方法:动物实验采用Wistar大鼠给予普通饲料作为对照组,45%脂肪含量高脂纯化饲料12周建立非酒精性脂肪性肝炎模型组,干预组分为自拟活血祛湿方高、中、低剂量组以及强肝胶囊组,给予对应药物干预12周。观察各组大鼠血清生化学、肝脏病理、炎症因子以及氧化应激指标的改变,通过观察对PPARα、SREBP-1c以及Toll-NF-κB信号转导通路的影响观察该方剂对模型大鼠肝脏的保护作用并探讨可能的机制。临床研究观察该方剂治疗80例非酒精性脂肪性肝炎患者的临床疗效,并对其安全性作出评价。结果:论文(一)自拟活血祛湿方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型肝细胞保护以及血脂调节作用的实验研究1一般情况及病理形态学实验过程中无动物死亡。与正常组比较,模型组大鼠皮毛油腻污秽,肝脏湿重增加,肉眼观察肝脏切面呈现黄色;HE染色可见肝组织内大量脂肪空泡,中央静脉附近大量炎性细胞浸润,NAS组织学病理评分>5分,证实NASH造模成功;与模型组相比,各干预组大鼠肝脏湿重下降,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组以及强肝胶囊组在改善肝脏病理方面较其他两组更为明显(P<0.05)。2肝功能及血脂与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TG、VLDL升高,HDL-C降低;干预后各组大鼠血清ALT、AST、TG、VLDL均降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组和强肝胶囊组较其他两组下降更为明显(P<0.05)。论文(二)自拟活血祛湿方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型抗氧化作用的实验研究1肝组织SOD、MDA水平与正常组比较,模型组大鼠肝脏SOD酶活力降低,MDA含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。干预后各组大鼠肝脏SOD酶活力升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);强肝胶囊组、中药中、高剂量组效果最为明显(P<0.05)。2肝脏组织中PPARαm RNA表达与正常组比较,模型组大鼠肝组织PPARαm RNA积分光密度比值降低,差异有统计学意义(P<0.05),干预后各组大鼠肝组织中PPARαm RNA积分光密度比值增加,差异有统计学意义(P<0.05),其中强肝胶囊和中药高剂量组效果最为明显(P<0.05)。3肝脏组织中SREBP-1c的表达与分布情况与正常组比较,模型组大鼠肝组织SREBP-1c m RNA积分光密度比值以及蛋白灰度值比值增加,差异有统计学意义(p<0.05),干预后各组大鼠肝组织中SREBP-1c m RNA积分光密度比值以及蛋白灰度值比值降低,差异有统计学意义(p<0.05),其中强肝胶囊以及中药高、中剂量组效果最为明显(P<0.05)。4免疫组化结果显示:模型组大鼠肝组织中央静脉附近棕黄色颗粒明显增多,并向周围组织弥散;各干预组中央静脉附近棕黄色颗粒减少,其中高剂量组以及强肝胶囊组改善最为明显。论文(三)自拟活血祛湿方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型Toll-NF-κB信号转导通路的干预作用与正常组比较,模型组大鼠肝组织中TNF-ɑ、TLR3、NF-κB p65 m RNA以及蛋白的表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05),各干预组大鼠肝组织中TNF-ɑ、TLR3、NF-κB p65 m RNA以及蛋白的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),自拟活血祛湿方高剂量组以及强肝胶囊组效果较其他组降低更为明显(P<0.05)。论文(四)自拟活血祛湿方治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床研究80例NASH患者随机分为两组,与强肝胶囊相比,自拟活血祛湿方在改善BMI、肝功、血脂、肝脏B超等方面效果更为明显,差异有统计学意义(P<0.05),且安全性评价为2级。结论:1 45%脂肪含量纯化高脂饲料饲养12周可建立Wistar大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型。自拟活血祛湿方各剂量组以及强肝胶囊组均能够降低大鼠肝脏湿重、保护肝功能、调节血脂,改善肝脏病理,提高肝脏抗氧化能力。其机制可能与通过调节PPARα下调相关靶基因SREBP-1c的表达调控肝脏脂肪合成有关。2自拟活血祛湿方可以抑制肝脏炎性反应并增强肝组织抗炎能力。可能机制有二:(1)抑制肝脏中炎症因子表达;(2)调节Toll-NF-κB信号转导通路。3根据各项指标比较结果,自拟活血祛湿方高剂量效果更为明显。4强肝胶囊以及自拟活血祛湿方临床治疗NASH患者有效,自拟活血祛湿方效果更为明显,且安全性为2级。