精液冷冻保存能够有效保障种质资源,提高良种公禽的利用率。目前,鸡精液冷冻技术的研究还未完全成熟,由于冷冻解冻温度、平衡时间、稀释剂和防冻剂浓度等因素的影响,导致冷冻和解冻后精子活力降低,引起氧化损伤等。褪黑素作为机体可自身合成分泌的物质,具有良好的抗氧化作用。以往对其在精液冷冻上的作用集中于人和鼠等哺乳动物,但其在禽类冷冻精液中的作用鲜有研究。本研究着力于鸡精液冷冻解冻温度以及褪黑素对公鸡冷冻精液冷冻效果的影响。采用光学显微镜观察法、精子尾部低渗肿胀法和姬母萨染色技术测定冷冻和解冻后精子活力、质膜完整率和顶体完整率;利用ELISA技术分别检测精液解冻后超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)含量、丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)水平。研究结果如下:1.比较距液氮表面1、2、3、4、5、6 cm处进行鸡精液颗粒冷冻及在36、37、38、39、40、41℃水浴进行颗粒解冻,通过显微镜观察法检测精子活力,结果表明距液氮表面3cm处进行鸡精液颗粒冷冻,在38℃水浴解冻活力最高。2.分别向鸡的冷冻稀释液中添加0、0.125、0.25、0.5 mg/ml褪黑素,冷冻解冻后,用显微镜观察法、精子尾部低渗肿胀法和姬母萨染色法检测精子活力、质膜完整率和顶体完整率,通过ELISA技术检测解冻后精液SOD、CAT、GPx、MDA及ROS水平。结果表明,添加0.25 mg/ml褪黑素可显著提高解冻后鸡精子活力、质膜完整率和顶体完整率(P<0.05),显著提高解冻后精液SOD、CAT和GPx含量(P<0.05),显著降低解冻后精液MDA和ROS水平(P<0.05)。本研究结果表明,距液氮表面3cm处进行鸡精液冷冻、在38℃水浴解冻,精子活力最高;添加0.25 mg/ml的褪黑素可以显著提高冷冻解冻后精子活力、质膜完整率和顶体完整率,并伴随着解冻后精液抗氧化酶SOD、CAT和GPx含量上升及精液MDA和ROS水平的降低。