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第一部分改良匹罗卡品诱导大鼠癫痫持续状态模型和脑电图的特点目的：建立有效、稳定的颞叶癫痫(TLE)大鼠模型,同时监测正常皮层脑电图和癫痫持续状态(SE)皮层脑电图,摸索并验证建模规律。方法：(1)改良癫痫模型：选用雄性成年SD大鼠22只,将大鼠随机分为正常对照组(n=6)和实验组(n=16)。提前20 h腹腔注射氯化锂(127mg/kg),给予匹罗卡品30 min前腹腔注射阿托品,以减少外周胆碱能反应。腹腔注射首剂匹罗卡品(100mg/kg)诱导痫性发作,此后每隔30 min注射匹罗卡品(25 mg/kg),直至出现SE。按照Racine分级,将大鼠行为分为Ⅰ～Ⅴ级,若反复三次给药后大鼠痫性发作未到达Ⅳ级,则视为诱导失败。被成功诱导出SE的大鼠方可被随机分入实验A组和实验B组,观察其行为学变化,记录SE潜伏期(即首次Ⅳ级及以上痫性发作与注射的时间间隔)、建模成功率和死亡率。正常对照组大鼠除用等量磷酸缓冲盐溶液(PBS)代替匹罗卡品外,其余处理措施均相同.(2)皮层脑电图监测：将实验组分为实验A组(n=6)和实验B组(n=6),分别在大鼠SE15min、30min予以乌拉坦麻醉大鼠,监测大鼠皮层脑电图。结果：(1)实验组中,大鼠成功点燃12只,死亡1只,诱导失败3只,造模总成功率为75%,其中匹罗卡品首剂成功率为75%,二剂成功率和三剂成功率分别为16.7%和8.3%,诱导失败率为18.8%。SE潜伏期(min)为29.7±15.1(13-65),匹罗卡品用量平均为112.5 ± 16.3 mg/kg。正常对照组大鼠均表现正常,为0级发作。(2)正常对照组中皮层脑电图正常,类似人类正常脑电图。实验A组脑电图表现为背景活动波幅较正常对照组略增高,可见低于6 Hz的慢活动逐渐增多,持续监测至SE发作90 min未见明显尖波、棘波和棘慢波；实验B组脑电图表现为爆发长程出现的尖波、棘波和不规则的尖慢复合波,痫性放电持续、稳定达2h以上。结论：(1)改良后的氯化锂-匹罗卡品模型致痫成功率高且动物死亡率低,发作潜伏期短,易操作,改良的护理方法可显著降低大鼠死亡率,有利于动物实验的开展及推广。(2)氯化锂-匹罗卡品大鼠模型脑电图同人类SE和颞叶癫痫脑电图改变相似,该模型应用于癫痫机制及药理学研究对临床有指导意义。(3)进一步证实神经元过度放电与传播存在时间差异性,SE发作30 min后再监测大鼠皮层脑电图更有意义。第二部分 阿米洛利/酸性液体对氯化锂—匹罗卡品致癫痫脑电图的影响目的：观察阿米洛利/酸性液体对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的皮层脑电图痫性放电的影响。方法：(1)诱导改良型匹罗卡品大鼠癫痫模型。选用雄性成年SD大鼠,提前20 h腹腔注射氯化锂(127mg/kg),在匹罗卡品注射前30 min,予以阿托品腹腔注射。予以首剂100 mg/kg匹罗卡品腹腔注射诱导痫性发作,此后每间隔30 min,继续以25mg/kg匹罗卡品注射,直至出现SE。若反复三次给药后大鼠痫性发作未到达Ⅳ级,则视为诱导失败,共诱导成功24只SE大鼠。(2)将24只SE大鼠随机分为四组,酸感受离子通道(ASICs)抑制组(阿米洛利)、PBS对照组(PBS)、阳性对照组(左乙拉西坦组)和酸性液体组(酸性PBS, pH= 1.57),每组6只。大鼠SE发作30 min后,麻醉大鼠,放置皮层电极,监测皮层脑电图30 min后,给予ASICs抑制组腹腔注射阿米洛利溶液,继续记录90 min脑电图,其余三组操作同ASICs抑制组,分别腹腔注射相对应药物。(3)比较单位时间内痫性放电频率、波幅、放电间期的变化。所有数据以30 min为一段,共分4段统计,即给药前(-30～0 min)、给药后0～30 min、 30～ 60min和60～90 min。因癫痫大鼠彼此间相关数据变异大,故设置每只大鼠给药前30 min的数值为基线值,即每只大鼠给药前的数值为1,给药后数值=给药后数据／给药前数据。结果：(1)皮层脑电图可监测到尖波、棘波,痫性放电持续、稳定。(2)ASICs抑制组与PBS对照组比较,在60-90 min时段的放电频率(0.69±0.08vs0.89±0.07)、波幅(0.70±0.16 vs0.90±0.08)均明显下降(P<0.05),放电间期(1.46±0.18 vs 1.15±0.10)延长(P<0.05)。(3)酸性液体组与PBS对照组比较,在0-30 min时段,痫性放电频率增高(1.05±0.07 vs0.9±0.07)(P<0.05),放电间期无明显延长(1.00±0.05 vs 1.12±0.09)(P<0.05)；在30-90 min时段,放电频率、波幅逐渐下降,放电间期延长,但无统计学差异(P>0.05)。(4)与阳性对照组比较,ASICs抑制组在0～90 min时段痫性放电频率、放电间期和放电波幅无统计学意义。结论：(1)阿米洛利能抑制锂-匹罗卡品诱导的痫性发作；(2)酸性液体可短暂性促进痫性发作,其作用机制可能与激活ASICs通道有关。第三部分ASICs和NHE的表达及阿米洛利的抗癫痫作用机制研究目的：探讨酸感受离子通道(ASICs).钠氢交换泵(NHE)在癫痫持续状态(SE)时的基因表达及阿米洛利在痫性发作中的作用。方法：(1)诱导改良型氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型。选用雄性成年SD大鼠,提前20 h腹腔注射氯化锂(127 mg/kg),提前30 min予以阿托品腹腔注射。予以首剂100 mg/kg匹罗卡品腹腔注射诱导痫性发作,此后每间隔30 min,继续以25 mg/kg匹罗卡品注射,直至出现SE。若反复三次给药后大鼠痫性发作未到达Ⅳ级,则视为诱导失败,共诱导成功18只SE大鼠。(2)选择正常大鼠为正常对照组(n=6),将诱导成功的SE大鼠随机分为3组：SE 1h组(PBS,i.p.).SE 2 h组(PBS,i.p.)和阿米洛利组(阿米洛利,i.p.),分别在入组时即注射相应药物。(3)分别于在SE发作1h时处死SE 1h组大鼠,SE发作2h时处死正常对照组、SE2h组和阿米洛利组大鼠,分离大脑皮层。提取总RNA,进行RT.PCR检测4组大鼠大脑皮层ASICla.ASIC3和NHEmRNA的表达。结果：(1)正常对照组大鼠大脑皮层几乎不表达ASIC3(0.01±0.00)和NHE(0.01±0.00),仅少量表达ASICla(0.19±0.01).(2)癫痫模型SE 1h组与正常对照组比较,大鼠大脑皮层ASICla(0.89±0.01vs 0.19±0.01).ASIC3(0.29±0.04vs0.01±0.00)及NHE(2.16±0.01vs 0.01 ±0.00)的mRNA表达均显著增加(P<0.01)。(3)癫痫模型SE 2h组与正常对照组比较,大鼠大脑皮层ASICla(1.24±0.01 vs 0.19±0.01).ASIC3(0.81±0.04 vs 0.01±0.00)及NHE(2.73±0.09 vs 0.01 ±0.00)的mRNA表达显著增加(P<0.01)；与SE 1h组比较,ASICla(1.24 ±0.01 vs 0.89±0.01).ASIC3(0.81±0.041vs0.29±0.04)及NHE(2.73± 0.09 vs 2.16±0.01)的mRNA表达显著增加(P<0.01)。(4)与SE 1h和SE2h比较,阿米洛利组大鼠皮层ASICLa(0.44±0.01).ASIC3(0.09±0.01)的mRNA表达显著下降(P<0.01),NHE的mRNA表达有所下降,但无统计学差异(P>0.05)。结论：(1)正常大鼠皮层几乎不表达ASIC3和NHE,仅少量表达ASICla;(2)痫性发作过程中ASICla、ASIC3及NHE的mRNA表达随着时间的推移逐渐增多,提示其参与癫痫的发生；(3)阿米洛利的抗癫痫作用与调控ASICla和ASIC3的表达有关,而与NHE无关。