【摘 要】
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实验目的:阐明难溶性贫铀氧化物致BEAS-2B细胞恶性转化的分子机制,为贫铀的危害及其防治提供有益的线索.实验方法:主要采用抑制消减杂交、cDNA转化重组技术和DNA测序方法分析
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实验目的:阐明难溶性贫铀氧化物致BEAS-2B细胞恶性转化的分子机制,为贫铀的危害及其防治提供有益的线索.实验方法:主要采用抑制消减杂交、cDNA转化重组技术和DNA测序方法分析比较了难溶性贫铀氧化物诱发人永生化支气管上皮细胞BEAS-2B细胞恶性转化前后差异表达基因的表达情况.主要结果如下:1运用LD-RTPCR(长片断反转录和线性PCR扩增)方法和cDNA转化重组技术,检测了BEAS-2B细胞和DU-BEAS-2B(恶性转化后18代)相关基因的表达差异;利用SSH技术构建了BEAS-2B细胞恶性转化前后的差异表达基因文库,对文库中cDNA克隆进行单向测序:623个有插入片段的克隆共代表444个不同基因.推论:;两个差减文库的cDNA可能代表了DU诱发人永生化支气管上皮细胞恶性转化前后差异表达的基因,此为进一步研究DU诱发恶性化病变发生的分子机制奠定了基础.2对623个克隆测序结果进行了同源性比较、功能预测等相应的生物信息学分析,并参考国际互联网上相关的数据库进行了相应的比较和分析,探讨了差异表达基因的功能和意义,其中有癌基因、抑癌基因、细胞生长代谢相关基因、细胞周期调控基因、转录因子、免疫相关基因、细胞信号传导和转运蛋白相关基因等重要基因,26个未知序列中可能包括含有与细胞恶性转化相关的重要基因,并有可能存在一些首次发现的与肺癌和细胞恶性转化发生相关的新基因,这有待于我们进一步验证,这些基因也是我们进行基因功能研究的重要候选基因.为进一步研究DU诱发BEAS-2B细胞恶性转化发生、发展的分子机制奠定了基础,也为肺癌的发生、分化、生理和病理机制及临床治疗研究提供了佐证和思路.
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