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酸敏感离子通道(ASICs)是一类配体门控性离子通道，能被胞外H+激活，开放的通道对Na+、Ca2+具有通透性。研究表明，ASICs参与一系列以组织酸化为特征的疾病，如炎症、脑缺血、肿瘤等。前期实验结果研究表明在大鼠肝纤维化的肝星状细胞上存在ASIC1a的高表达，并参与肝星状细胞的活化过程，但具体机制尚不清楚。为此，本研究选用大鼠肝星状细胞为研究对象，采用胞外血小板衍生因子(Platelet derived growth factor, PDGF)刺激肝星状细胞活化体外模型，探讨ASIC1a在PDGF诱导的肝星状细胞活化中发挥的作用及其可能的分子机制。目的：本研究旨在观察ASIC1a对血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)诱导肝星状细胞活化的影响，并探讨其作用的分子机制。内容：1.观察PDGF刺激HSCs过程中，ASIC1a和CaMKII的表达变化；2.利用ASIC1a siRNA建立体外ASIC1a的表达沉默模型并验证其沉默效率；3.观察沉默或阻滞ASIC1a后，肝星状细胞活化指标的改变；4.探讨ASIC1a在PDGF诱导肝星状细胞活化过程中作用的分子机制；方法：1. PDGF(0、5、10、20ng/mL)，(0、12、24、48h)作用于大鼠肝星状细胞后，通过Western-blot法检测ASIC1a和CaMKII的表达。2.采用特异性ASIC1a siRNA建立体外ASIC1a的表达沉默，采用荧光倒置显微镜、RT-PCR、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及Western-Blot法检测特异性siRNA对ASIC1a的沉默效率及其对ASIC1a mRNA和蛋白的抑制作用；3.选择HSC-T6细胞株为实验对象，设正常组、PDGF模型组(10ng/mL)、电压门控性Ca2+通道阻滞剂组(5M nimodipine,3M ω-conotoxin MVIIC)、PcTx1组（100ng/mL）、特异性ASIC1a SiRNA沉默组、ASIC1a SiRNA沉默的阴性对照组，激光共聚焦技术检测胞内[Ca2+]i水平；MTT和Transwell法检测细胞增殖和趋化能力；实时荧光定量PCR及Western-Blot法检测肝星状细胞活化相关基因-SMA,TGF-, Col-1, MMP-13, TIMP-1的含量，比较其差异性。4.将PDGF作用于肝星状细胞24h后，采用Western-blot法检测各组细胞p38、ERK1/2、JNK的磷酸化水平。结果：1. PDGF诱导肝星状活化过程中，ASIC1a和CaMKII蛋白表达呈时间和剂量依赖性，且均在24h,10ng/mL时二者表达量达到最大水平；2.化学合成的特异性ASIC1a siRNA可成功转染入大鼠肝星状细胞中，且明显下调ASIC1a mRNA和蛋白表达量；3.基因水平干预ASIC1a表达或阻断ASIC1a可导致肝星状细胞胞内Ca2+浓度降低，CaMKII的表达降低，且可抑制PDGF诱导的大鼠肝星状细胞活化，具体表现为：细胞增殖和趋化能力降低，炎症因子的表达量下降，胶原沉积减少，基质金属蛋白酶及其抑制剂的比值升高；4.沉默或阻断ASIC1a可抑制PDGF诱导的ERK1/2及JNK磷酸化水平的升高。结论：1. ASIC1a和CaMKII参与PDGF诱导肝星状细胞活化过程；2. ASIC1a siRNA转染可成功构建大鼠肝星状细胞ASIC1a表达沉默模型；3.沉默或抑制ASIC1a抑制PDGF诱导Ca2+超载，延缓肝星状细胞的活化；4. ASIC1a通过调节ERK1/2及JNK信号通路发挥抑制PDGF诱导的大鼠肝星状细胞活化的作用；