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世界范围内,膀胱癌发病率居于男性恶性肿瘤的第七位和女性恶性肿瘤的第十位以后。而在我国,膀胱癌发病率位居男性全身肿瘤的第八位,是泌尿系最常见的恶性肿瘤；膀胱癌发病率城市高于农村,男性高于女性,呈逐渐上升趋势。目前,膀胱癌的治疗主要为传统的手术治疗和放、化疗,然而,复发率较高。因此,新的有效地治疗膀胱癌的手段迫切需要。我们前期的研究工作表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂是一类高效低毒的治疗膀胱肿瘤的药物。因此,对其治疗膀胱肿瘤的相关途径进行深入的探讨,具有重要意义。世界范围内,膀胱癌发病率居于男性恶性肿瘤的第七位和女性恶性肿瘤的第十位以后。而在我国,膀胱癌发病率位居男性全身肿瘤的第八位,是泌尿系最常见的恶性肿瘤：膀胱癌发病率城市高于农村,男性高于女性,呈逐渐上升趋势。目前,膀胱癌的治疗主要为传统的手术治疗和放、化疗,然而,复发率较高。因此,新的有效地治疗膀胱癌的手段迫切需要。我们前期的研究工作表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂是一类高效低毒的治疗膀胱肿瘤的药物。因此,对其治疗膀胱肿瘤的相关途径进行深入的探讨,具有重要意义。目的：旨在通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)作用于膀胱肿瘤细胞前后自噬标志物和凋亡标志物的表达情况,探讨自噬和凋亡在TSA杀伤膀胱肿瘤细胞过程中所起的作用。TSA能否通过提高细胞CAR的表达水平促进溶瘤腺病毒对低CAR表达的膀胱癌细胞的转染。方法： MTT测定细胞活力；光镜和电镜观察细胞形态学变化和细胞超微结构；流式细胞术检测细胞凋亡和周期；通过TCID50测定重组腺病毒滴度和纯度；实时定量PCR检测Caspase-3、Bcl-2、ATG5和Beclinl在转录水平的表达；Western blotting检测细胞HDAC4、P62、LC3B、p-ERK、ERK、P53、Caspase-3、Bax、 Bcl-2、E1A和CAR的表达。结果：(1)TSA可有效抑制膀胱肿瘤细胞T24和EJ的增殖,并呈剂量依赖性；透射电镜显示TSA作用膀胱肿瘤细胞T24和EJ24h出现大量自噬小体。流式细胞术发现200nmol/lTSA处理的膀胱肿瘤细胞48h出现早期凋亡；200nmol/lTSA作用于EJ细胞24h后Caspase-3表达无显著变化和Beclin的表达无显著变化(P>0.05)；Bcl-2表达较低,ATG5明显升高(P<0.05)。作用48h以后,Caspase-3、Bcl-2、ATG5和Beclin的表达明显降低(P<0.05)。200nmol/l TSA作用于T24细胞24h后Caspase-3表达水平无显著变化(P>0.05)；Bcl-2表达水平较低,ATG5和Beclin的表达水平明显升高(Jp<0.05)。作用48h以后,Caspase-3、bcl-2、ATG5和Beclin的表达明显降低(P<0.05)。Western blotting显示跟对照组相比,TSA作用于EJ细胞后,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显降低；促凋亡蛋白P53、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高；呈剂量依赖性；自噬相关蛋白P62随着剂量的增加表达逐渐升高；LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值逐渐升高；p-ERK和ERK的表达明显降低；与ERK1／2的特异性抑制剂PD98059和U0126作用—致。(2)成功获得高滴度、高纯度重组腺病毒,重组腺病毒可有效抑制CAR表达阳性的膀胱肿瘤细胞5637和EJ的增殖,并呈剂量依赖性；对CAR表达阴性的膀胱肿瘤细胞T24没有明显效应；光镜显示重组腺病毒感染后的膀胱肿瘤细胞变大、变圆并脱落；透射电镜显示重组腺病毒感染后的膀胱肿瘤细胞内出现大量病毒颗粒,而未感染重组腺病毒的膀胱肿瘤细胞内未发现该现象。流式细胞术发现感染重组腺病毒的膀胱肿瘤细胞出现早期凋亡,细胞周期被阻滞于G2／M期；Western blotting显示感染重组腺病毒的膀胱肿瘤细胞高表达E1A,促凋亡蛋白P53、Caspase-3、Bax表达明显升高,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达降低。虽然TSA能上调T24细胞CAR的表达水平,但是TSA并不能提高溶瘤腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对T24细胞的转染效率和杀伤。结论：TSA能够明显抑制膀胱癌细胞生长；TSA通过抑制细胞自噬促进膀胱癌细胞凋亡；TSA通过抑制RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制细胞自噬。溶瘤腺病毒Ad-UPⅡ-E1A可在体外靶向杀伤CAR.高表达膀胱肿瘤细胞5637、EJ,对CAR低表达的T24细胞杀伤较弱；溶瘤腺病毒Ad-UPⅡ-E1A可诱导5637和EJ细胞发生凋亡；该溶瘤腺病毒杀伤膀胱肿瘤细胞的机制可能与诱导细胞凋亡有关。然而,曲古菌素A并不能提高溶瘤腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对CAR低表达的膀胱癌细胞的转染效率和杀伤效应。