论文部分内容阅读
第一章研究目的:运用胆道感染联合胆管狭窄的方式制备兔肝胆管结石模型,探讨此种造模方法的可行性以及肝胆管结石的基本病理生理变化,为进一步研究消炎利胆片和熊去氧胆酸对肝胆管结石成石的影响做准备。研究方法:30只实验兔随机分为空白对照组和实验组,每组15只。空白组行开腹+胆总管插管注入无菌生理盐水（0.2ml/Kg）,不做胆道感染与胆管狭窄;实验组行开腹+胆管插管注入细菌（大肠埃希菌菌株ATCC 25922菌液;浓度:1.0x10~4CFU/0.1ml,用量0.2ml/kg）+胆总管狭窄（狭窄程度:0.7mm）处理,制作肝胆管结石的动物模型。于造模完成后1周、3周、5周行彩超检查,动态观测成石情况,术后5周处死实验动物,取肝脏组织做HE染色观察实验动物肝脏及胆管的病理变化。结果:1.动物一般情况:所有实验动物均完成模型构建。实验周期5周,实验中空白对照组无动物死亡,存活率100%,实验组死亡动物3只,存活率80%（12/15）。2.胆道成石情况:实验组术后1周彩超检查可见胆总管扩张,胆囊内可见胆泥影;术后3周彩超检查可在胆囊、胆管内见胆泥及结石影;术后5周可在肝内、胆囊内见广泛结石影;实验5周,实验组11只成石,成石率91.67%（11/12）。空白组所有动物均未形成结石。3.肝脏大体标本情况:空白组肝脏形态正常,表面光滑、质地柔软且富有弹性,胆囊形态大小正常,胆道未见明显扩张。实验组动物肝脏因受累情况不同,表现出不同形态:（1）病变较重者,肝脏与周围组织致密粘连,形态不规则,呈棕黄或黄褐色,质地较硬,表面密布黄白相间的结节,胆囊、胆管扩张;（2）病变较轻者,肝脏与周围组织粘连较轻,形态基本正常,肝脏呈暗红色,质地较韧,表面散在分布黄白色结节,胆囊稍大,肝内外胆管稍扩张。4.HE染色结果:空白组动物肝脏及胆管组织细胞形态正常,组织结构完整清晰,未见明显病理变化。实验组动物肝脏组织结构明显受损,正常肝小叶结构破坏,肝细胞数量明显减少,门管区明显扩大,大量纤维组织增生,局部可见“假小叶”形成,增生纤维组织内可见大量新生胆管及淋巴细胞、中性粒细胞聚集;胆管管壁增厚,黏膜上皮排列不整齐,局部黏膜上皮坏死后缺失,固有层炎细胞浸润,以淋巴细胞为主;黏膜下纤维组织增生,增生纤维较为致密,局部可见淋巴细胞、巨噬细胞。结论:1.以胆道感染联合胆管狭窄的方式制作肝胆管结石的动物模型是可行的,以此种方式制备的动物模型具有和临床病例相似的病理生理变化。2.以胆总管下端狭窄（狭窄程度0.7mm）和量化的细菌用量（大肠杆菌,浓度:1.0x10~4CFU/0.1ml,用量0.2ml/kg）的方式,操作简单,机体更容易耐受,是一种存活率及成石率均较高的兔肝胆管结石动物模型制备方法。第二章研究目的:通过动物实验研究消炎利胆片和熊去氧胆酸对肝胆管结石成石的影响,为进一步开展肝胆管结石的基础和临床研究提供实验经验和理论支持。研究方法:60只实验兔随机分为4组,分别为对照组、消炎利胆片组、熊去氧胆酸组和联合用药组,每组15只。所有动物均做胆总管狭窄+胆道感染处理,并于造模手术后第1天开始采取不同的喂养方式:a、对照组:普通混合饲料喂养;b、消炎利胆片组:普通混合饲料+消炎利胆片喂养（剂量:75mg/Kg/d）;c、熊去氧胆酸组:普通混合饲料+熊去氧胆酸片喂养（剂量:10mg/Kg/d）;d、联合用药组:普通混合饲料+消炎利胆片（剂量:75mg/Kg/d）+熊去氧胆酸片（剂量:10mg/Kg/d）喂养;分别于术后1周、3周、5周同时相采集实验动物耳缘静脉血2ml,检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸基转移酶（AST）、总胆汁酸（TBA）的量;并于术后5周行腹部彩超检查观察记录成石情况后处死实验兔,取出并称取肝脏重量,抽取胆汁2ml检测胆汁中磷脂（PL）、总胆汁酸（TBA）、总胆固醇（TC）三种主要成分的量。观察记录成石情况及结石形态,依据不同结石形态记录各组动物成石得分,比较各组间成石情况;取肝脏及胆管组织做HE染色观察比较各组病理变化严重程度。结果:1.动物存活情况:实验中各组实验兔均有不同数量的死亡,实验5周,对照组存活动物12只,存活率80%（12/15）;消炎利胆片组存活14只,存活率93.33%（14/15）;熊去氧胆酸组与联合用药组均存活10只,存活率66.67%（10/15）。与对照组比较,各用药组的实验动物存活率差异均无统计学意义（P＞0.05）。2.胆道成石情况:实验5周后,对照组与用药组均有不同程度的成石,表现为胆泥、泥沙样结石、块状固体结石等不同形态。根据结石形态对各组动物进行成石评分,各用药组的成石评分均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,而各用药组间相互比较,成石评分差异无统计学意义（P＞0.05）。3.术后5周各组肝脏重量:术后5周处死实验兔,完整取出肝脏后称取全肝重量,各组间肝脏重量差异无统计学意义（P＞0.05）。4.术后各组肝功能比较:分别检测各组实验动物术后1周、3周、5周血清中ALT、AST、TBA的含量,结果显示,术后对照组动物肝功能指标升高明显,术后第1、3、5周各用药组动物血清中ALT、AST的含量明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,各组间TBA含量差异无统计学意义（P＞0.05）。5.胆汁成分比较:各组动物胆汁中PL、TBA、TC含量的分析结果显示,与对照组比较,消炎利胆片组动物胆汁中TBA的含量降低（P＜0.05）;熊去氧胆酸组胆汁中PL、TBA、TC含量均低于对照组（P＜0.05）。6.各实验组肝脏及胆管病理变化:HE染色结果显示,各组动物肝脏及胆管组织均表现出不同程度的细胞坏死、纤维组织增生及炎细胞浸润等病理变化。采用5级法对各组肝脏细胞坏死、纤维组织增生、炎细胞浸润进行评分后比较各组间病变程度。结果显示,消炎利胆片组肝细胞坏死、肝纤维组织增生、肝脏炎细胞浸润病变程度均较对照组减轻（P＜0.05）;熊去氧胆酸组和联合用药组肝脏及胆管病理损害程度与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:消炎利胆片和熊去氧胆酸可能具有防止胆道结石形成的作用。消炎利胆片和熊去氧胆酸主要通过调节胆汁中胆汁酸、胆固醇、磷脂三者的相对构成比以及减轻肝脏损害的作用来预防结石的形成,但两药联用的作用效果以及最佳的联合用药比例还需进一步研究探讨。