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目的:筛选中药清热消炎复方制剂体外抗流感病毒(Flu),呼吸道合胞病毒(RSV),柯萨奇病毒(CVB3)的有效配方制剂,并进一步观察其有效配方制剂体内抗流感病毒活性。 方法:本实验分两个阶段。第一阶段为体外药物筛选。为比较清热消炎复方制剂2、3、7、9#不同配方抗Flu、RSV和CVB3的作用,在微量细胞培养板上,通过观察细胞病变效应(CPE),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率和病毒抑制率,血凝试验检测流感病毒血凝滴度,以确定抗病毒的治疗指数(TI)较高的配方为有效配方制剂。第二阶段,通过体外抗病毒活性测定的结果,选择1个有效配方制剂的3个无毒剂量(0.1g·kg-1·d-1,0.5g·kg-1·d-1,1.2g·kg-1·d-1)对感染流感病毒的小白鼠进行治疗,疗程6天。通过观察小鼠死亡率和平均存活天数来评价其对感染流感病毒小鼠的死亡保护作用;通过测定小鼠肺指数以及肺内流感病毒的血凝滴度,观察肺部病变程度,来评价其对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用。从而判定该有效配方的体内抗流感病毒活性。两个阶段实验均设病毒唑为阳性对照药,抗病毒口服液为中药对照药。 结果: 1、清热消炎复方制剂2、3、7、9#具有较好的的体外抗Flu、RSV、CVB3活性,抗Flu的IC50分别为108.8,110.8,117.6,63.2μg/mL;抗RSV的IC50分别为95.9,96.7,105.2,66.9μg/mL;抗CVB3的IC50分别为101.2,96.1,103.7,67.8μg/mL。其中9#制剂的抗病毒活性较强,优于2、3、7#制剂(P<0.01)而与病毒唑和抗病毒口服液同效(P>0.05)。 2、根据抗病毒治疗指数(TI),将它们分为2类:(1)高效低毒:TI>5,即清热消炎复方制剂9#,以及阳性对照药病毒唑和中药对照药抗病毒口服液;(2)有毒有效:2<TI<5,即清热消炎复方制剂2、3、7#。 3、清热消炎复方制剂2、3、7、9#在5~160μg/mL范围内与Flu抑制率呈明显的量效关系;在2~128μg/mL范围内与RSV、CVB3抑制率呈明显的量效关系(P<0.05)。清热消炎9#制剂在160μg/mL时能完全抑制Flu在MDCK细胞内的增殖;在128μg/mL时完全抑制RSV、CVB3在HeP一2细胞内的增殖。 4·体内实验中清热消炎复方制剂9#0 .19·kg一’·d一’,0.59·kg一’·d一’,1.29·kg一’·d一’3个剂量分别将感染流感病毒小鼠死亡率由75%降至35%、30%和25%;延长染毒后的平均存活时间由8.3d至10.5d、11.sd、13.2d;降低肺炎小鼠的肺指数由1.65至1.40、1.32、1.25;降低小鼠肺流感病毒的血凝滴度(经对数转换)由1.30至1.09、1.02、0.78(P<0.01)。1 .29·kg‘,·d‘,剂量与0.099·kg一,·d一,病毒吟相当(P>0.05),优于1.59·kg一l·d一,抗病毒口服液(P<0.05)。 结论: 1、清热消炎复方制剂9“为有效的配方制剂,其相应的配伍工艺为有效工艺,可作为进一步提纯有效单体之用。 2、清热消炎复方制剂2、3、7、9#有明显的抑制Flu、Rsv和evB3在MneK细胞和HeP一2细胞内生物合成作用。其中9弃制剂较2.、3、7#抗病毒效果更好(P<0.01),与病毒哇相当(P>.05)。 3、清热消炎复方制剂9#在0.19·kg一,·d-l,0.59·kg一‘·d一,,1.29·kg一,·d一,连续给药6d能显著提高感染流感病毒小鼠生存率和延长存活时间;降低肺炎小鼠的肺指数和肺流感病毒的血凝滴度(P<0 .01)。1 .29·kg一,·川作用与病毒哇相当(P>.05)。