【摘 要】
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肠炎沙门菌可感染多种畜禽,并通过肉、蛋、奶等制品感染人类,引起人类食物中毒,是一种重要的人兽共患、食源性病原菌。为调查邯郸及周边地区规模化鸡场沙门菌的流行情况,本研究以肠炎沙门菌（ATCC13076）、鼠伤寒沙门菌（ATCC14028）、鸡白痢沙门菌（ATCC13036）、鸡伤寒沙门菌（ATCC9184）基因组为模板建立多重PCR方法,对采集的6500份种鸡场样品进行多重PCR检测,共分离到343
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肠炎沙门菌可感染多种畜禽,并通过肉、蛋、奶等制品感染人类,引起人类食物中毒,是一种重要的人兽共患、食源性病原菌。为调查邯郸及周边地区规模化鸡场沙门菌的流行情况,本研究以肠炎沙门菌（ATCC13076）、鼠伤寒沙门菌（ATCC14028）、鸡白痢沙门菌（ATCC13036）、鸡伤寒沙门菌（ATCC9184）基因组为模板建立多重PCR方法,对采集的6500份种鸡场样品进行多重PCR检测,共分离到343株沙门菌,沙门菌分离率为5.28%。其中,肠炎沙门菌295株、鼠伤寒沙门菌10株、鸡白痢/鸡伤寒沙门菌2株、未定型沙门菌36株,分别占沙门菌分离株的86.01%、2.92%、0.58%、10.50%,发现肠炎沙门菌是邯郸及周边地区蛋种鸡生产链中沙门菌主要流行血清型。Gre（包括Gre A和Gre B）是一种转录延长因子,广泛存在于革兰阴性菌中,前期研究发现Gre因子调控土拉弗朗西斯菌、鼠疫耶尔森菌的致病力,并且可以通过调控鼠伤寒沙门菌hil D基因的的表达影响致病力。为探究Gre因子对肠炎沙门菌致病力的影响,本研究以肠炎沙门菌ATCC13076为亲本株,利用同源重组构建了Δgre AΔgre B缺失株及反式回补株。环境适应性检测显示,gre A、gre B双基因缺失对肠炎沙门菌的温度敏感性和对高浓度Na Cl抵抗力无显著影响,但gre A、gre B双基因缺失导致肠炎沙门菌对数期延迟,且显著降低该菌对酸碱环境、SDS的抵抗力,同时显著降低该菌的生物膜形成能力和运动力;然而,gre A、gre B双基因缺失使肠炎沙门菌对H2O2的抵抗力显著增加,表明Gre因子多向调控肠炎沙门菌的环境应激能力。细胞感染试验表明,gre A、gre B双基因缺失降低肠炎沙门菌入侵细胞及胞内增殖的能力。雏鸡感染试验表明gre A、gre B双基因缺失导致肠炎沙门菌经皮下感染雏鸡的致病能力明显降低,而且Δgre AΔgre B缺失株在鸡的肝脏、脾脏和肺脏中细菌载量均低于野毒株,进一步证明Gre因子缺失对肠炎沙门菌的致病力影响显著。为分析Gre因子影响肠炎沙门菌致病力的分子机制,本研究对肠炎沙门菌亲本株和Δgre AΔgre B缺失株进行了转录组测序（RNA-seq）。结果表明,gre A、gre B双基因缺失使肠炎沙门菌的316个基因差异表达,占肠炎沙门菌编码基因总数的7%,其中179个基因转录上调,137个基因转录下调;差异表达基因主要集中于代谢通路,占KEGG分类基因的71%;而且,差异表达基因主要分布于40个预测操纵子（2个基因以上）,涉及细菌运动、粘附和多种物质代谢。提示Gre因子通过调控肠炎沙门菌表型相关基因转录表达参与细菌致病力调控。综上,肠炎沙门菌是邯郸及周边地区沙门菌流行血清型,Gre因子主要通过肠炎沙门菌代谢通路相关基因转录表达多向调控肠炎沙门菌的环境应激能力,Gre因子缺失降低肠炎沙门菌对细胞感染和对雏鸡的致病力。本研究为肠炎沙门菌的预防治疗提供了一种新型疫苗或药物候选靶位。
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