【摘 要】
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目的:课题组前期研究已经报道apelin-13/APJ系统促血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖。文献报道线粒体未折叠蛋白反应（mt UPR）和Lon protease-like 1（Lonp1）能够诱导细胞增殖。上调类泛素蛋白F adjacent transcript 10（FAT10）能够诱导mt UPR的发生和细胞增殖,且生物信息学预测FAT10和Lonp1具有相互关系。据此提出FAT10化修饰
【基金项目】
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国家自然科学基金（No. 81973326）； 湖南省自然科学基金（No. 2018JJ6070）；
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目的:课题组前期研究已经报道apelin-13/APJ系统促血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖。文献报道线粒体未折叠蛋白反应（mt UPR）和Lon protease-like 1（Lonp1）能够诱导细胞增殖。上调类泛素蛋白F adjacent transcript 10（FAT10）能够诱导mt UPR的发生和细胞增殖,且生物信息学预测FAT10和Lonp1具有相互关系。据此提出FAT10化修饰Lonp1诱导mt UPR介导apelin-13/APJ系统促VSMCs增殖。本课题拟采用Western Blot、免疫共沉淀、免疫荧光、透射电镜和流式细胞术等技术阐明FAT10化修饰Lonp1是apelin-13/APJ系统诱导mt UPR关键环节,揭示apelin-13/APJ系统促VSMCs增殖新机理。方法:1.透射电镜观察人主动脉平滑肌细胞（HA-VSMCs）线粒体形态;2.Western Blot测定HA-VSMCs中FAT10、HSP60、mt HSP70、Lonp1、Clp P、a-SMA、PCNA、ki67、GAPDH及a-tubulin的表达;3.免疫荧光测定HA-VSMCs中FAT10、HSP60、mt HSP70、Lonp1、Clp P、a-SMA、PCNA,ki67及ROS的表达;4.RNA干扰:设计si RNA链干扰HA-VSMCs中FAT10和Lonp1的表达;5.免疫荧光和免疫共沉淀测定HA-VSMCs中FAT10和Lonp1的相互作用;6.流式细胞术和CCK8检测si FAT10和si Lonp1对HA-VSMCs增殖的影响;结果:1、Apelin-13促进HA-VSMCs增殖以及增殖抗原PCNA及ki67的表达;2、Apelin-13诱导HA-VSMCs线粒体形态不规则改变和增高的线粒体ROS水平;3、Apelin-13诱发mt UPR标志蛋白Lonp1、HSP60、mt HSP70及Clp P的表达;4、Silonp1抑制apelin-13诱导的HA-VSMCs中mt UPR标志蛋白HSP60、mt HSP70及Clp P的表达;5、Apelin-13促进HA-VSMCs中FAT10的表达;6、Apelin-13促进HA-VSMCs中FAT10和Lonp1的共定位和相互作用;7、SiFAT10抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中mt UPR标志蛋白Lonp1,HSP60、mt HSP70及Clp P的表达;8、SiLonp1抑制apelin-13诱导的HA-VSMCs增殖以及增殖抗原PCNA及ki67的表达;9、SiFAT10抑制apelin-13诱导的HA-VSMCs增殖以及增殖抗原PCNA及ki67的表达;结论:FAT10化修饰Lonp1诱导mt UPR介导apelin-13/APJ系统促血管平滑肌细胞增殖
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