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植物乳杆菌作为益生菌与人类的关系越来越密切,它能够提高人体的免疫力,分泌细菌素来抑制发酵食品中的腐败菌和致病菌,还能降低血清胆固醇等作用。前期分离到1株乳酸菌DMDL9010(Lactobacillus sp.DMDL9010),在发酵过程中能有效地降解泡菜中亚硝酸盐,应用的潜力非常大。本文在传统菌种鉴定方法的基础上,利用分子生物学对该菌进行鉴定;同时利用p G+host9构建敲除载体;初步探索了乳酸菌DMDL9010的基因改造的方法。利用传统的16S r DNA分子生物学鉴定方法和生理生化特征将分离的新菌株DMDL 9010鉴定到种的水平,但无法在植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)与戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)之间做出准确的鉴别。利用生物信息学的分析方法,找到这两种菌在进化过程中较为保守的序列,即L-乳酸脱氢酶1编码序列,以此为标记进行PCR扩增其上游与下游DNA序列,对PCR产物进行测序以及序列比对分析,将乳酸菌DMDL 9010鉴定为植物乳杆菌DMDL 9010。为了利用p G+host9质粒对植物乳杆菌DMDL9010进行基因改造,构建了双交换重组载体p GH-up-down和单交换重组载体p GH-nir。优化了重叠延伸PCR的反应条件,拼接得到up-down片段,并筛选得到用于构建重组载体的宿主菌大肠杆菌MC1061和TG1,将具有粘性末端up-down片段克隆p G+host9中,经菌落PCR和双酶切鉴定得到双交换重组载体p GH-up-down;利用同样的方式构建了失活植物乳杆菌DMDL9010亚硝酸还原酶的单交换重组载体p GH-nir。初步探索了植物乳酸菌DMDL9010的基因改造的方法和降解亚硝酸盐的机制。改进植物乳杆菌电转化感受态细胞的制备方法,电转化重组质粒到植物乳杆菌DMDL9010中,电转化率达到533cfu/μg;建立乳酸菌菌落PCR方法,用于重组菌的快速鉴定;提高了p G+host9在植物乳杆菌DMDL9010中温度敏感性,将含有重组质粒的菌在42°C下连续转接48h并增加培养温度差,使菌体中质粒保留率达到0.0076%;由于插入到质粒的重组DNA片段较短,降低了重组率,还未能筛选到单交换重组菌。初步研究发现该菌降解亚硝酸盐主要通过酶降解和酸降解方式,但两种方式如何协同降解亚硝酸盐仍需进一步研究。