一株植物乳杆菌的分子鉴定及其亚硝酸盐降解相关基因敲除

被引量 : 0次 | 上传用户:chao1028
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
植物乳杆菌作为益生菌与人类的关系越来越密切,它能够提高人体的免疫力,分泌细菌素来抑制发酵食品中的腐败菌和致病菌,还能降低血清胆固醇等作用。前期分离到1株乳酸菌DMDL9010(Lactobacillus sp.DMDL9010),在发酵过程中能有效地降解泡菜中亚硝酸盐,应用的潜力非常大。本文在传统菌种鉴定方法的基础上,利用分子生物学对该菌进行鉴定;同时利用p G+host9构建敲除载体;初步探索了乳酸菌DMDL9010的基因改造的方法。利用传统的16S r DNA分子生物学鉴定方法和生理生化特征将分离的新菌株DMDL 9010鉴定到种的水平,但无法在植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)与戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)之间做出准确的鉴别。利用生物信息学的分析方法,找到这两种菌在进化过程中较为保守的序列,即L-乳酸脱氢酶1编码序列,以此为标记进行PCR扩增其上游与下游DNA序列,对PCR产物进行测序以及序列比对分析,将乳酸菌DMDL 9010鉴定为植物乳杆菌DMDL 9010。为了利用p G+host9质粒对植物乳杆菌DMDL9010进行基因改造,构建了双交换重组载体p GH-up-down和单交换重组载体p GH-nir。优化了重叠延伸PCR的反应条件,拼接得到up-down片段,并筛选得到用于构建重组载体的宿主菌大肠杆菌MC1061和TG1,将具有粘性末端up-down片段克隆p G+host9中,经菌落PCR和双酶切鉴定得到双交换重组载体p GH-up-down;利用同样的方式构建了失活植物乳杆菌DMDL9010亚硝酸还原酶的单交换重组载体p GH-nir。初步探索了植物乳酸菌DMDL9010的基因改造的方法和降解亚硝酸盐的机制。改进植物乳杆菌电转化感受态细胞的制备方法,电转化重组质粒到植物乳杆菌DMDL9010中,电转化率达到533cfu/μg;建立乳酸菌菌落PCR方法,用于重组菌的快速鉴定;提高了p G+host9在植物乳杆菌DMDL9010中温度敏感性,将含有重组质粒的菌在42°C下连续转接48h并增加培养温度差,使菌体中质粒保留率达到0.0076%;由于插入到质粒的重组DNA片段较短,降低了重组率,还未能筛选到单交换重组菌。初步研究发现该菌降解亚硝酸盐主要通过酶降解和酸降解方式,但两种方式如何协同降解亚硝酸盐仍需进一步研究。
其他文献
期刊
<正> 存在主义是现代资产阶级有广泛影响的主观唯心主义和非理性主义哲学流派。存在主义的产生和发展,同三十年代资本主义制度发生的危机现象(世界经济危机)有关。它首先产生
目的:探讨紫外分光光度法测定竹沥中总酚含量的方法。方法:将样品加盐酸调pH值1~2,再用乙醚萃取,萃取液合并,挥去醚,用甲醇定容,在λmax=220nm处测定吸光度A值。结果:愈创木
介绍了氨氧化炉关键部件制造的要点及制造过程。针对制造过程中出现的难点,提出了一套切实可行的制造工艺和质量控制要求。
本文首先采用1,3-丙烷磺内酯与聚醚胺D230合成了一种氨基磺酸盐,以此双阴离子氨基磺酸盐为亲水单体,与环氧树脂反应合成了不同长度疏水链段的双阴离子磺酸盐型反应性环氧树脂
城市轨道交通网络化资源共享对于城市轨道交通线路的规划与建设具有相当重大的意义,从轨道交通网络系统角度,对网络资源共享、技术标准、机电系统互联互通制式标准、大型换乘
以农民为技术创新实施的主体,通过文献综述,明确农民实施技术创新的17个影响因素,通过问卷设计和数据分析,进行问卷的信度和效度检验,并通过因子分析,确定个人因素、组织创新
茉莉花是热带花卉,在中国本土的普及经历了由南向北的过程,具有一定的经济价值。宋代咏茉莉花的诗歌作品逐渐增多,南渡时期的贬谪诗人对茉莉花审美价值的发现做出了巨大的贡
目的:观察丹蛭降糖胶囊对老年糖尿病早期肾病(DN)患者尿微量白蛋白的影响。方法:将60例老年糖尿病早期肾病患者随机分为治疗组和对照组,两组均常规使用降糖药,治疗组加用丹蛭