背景:胆管癌（Cholangiocarcinoma,CCA）是一种恶性程度高,早期症状不明显的难治性恶性肿瘤。尽管近年来对胆管癌的发生发展及治疗有了明显的进展,但是因其快速转移、侵袭力强和易复发的特点,患者确诊时大多数处于晚期阶段（70%）,手术机会明显减少,预后较差。因此化疗仍然是治疗胆管癌的主要手段之一。5-Fu（5-Fluorouracil）是一种广泛用于治疗实体肿瘤（如乳腺、头颈部、胰腺、胃肠道等）的抗肿瘤药物。超过80%的5-Fu通常主要在肝脏中分解代谢,因此能够到达肿瘤部位的药物剂量较低,并且因其代谢快速,半衰期短,耐药性等原因,常常需要加大治疗剂量,所以通常患者会出现严重的毒性反应。因此急需寻找新的联合治疗方法改善其疗效,减少副反应。近年来,许多研究发现外泌体作为直径为50-200nm的细胞外小囊泡,是一种新兴的细胞间通讯模式,对于癌症及相关疾病的进展治疗均有帮助。由于其具有天然来源性、高生物相容性、低免疫原性等特点,在药物输送和靶向治疗方面具有巨大潜力。目前发现外泌体可以将活性治疗物质递送至肿瘤细胞,作为化疗药物载体在体内和体外抑制恶性肿瘤的增殖和生长,并且具有从母细胞中获得的核酸及蛋白,在肿瘤微环境及细胞调控方面也具有重要作用,对于肿瘤的诊断和治疗意义重大。目的:探究外泌体装载5-Fu对胆管癌的抑制作用。方法:选择人骨髓间充质干细胞来源的外泌体,通过超速离心法分离提纯外泌体,并运用Western Blot分析外泌体特异性标记物CD9、TST101、透射电镜观察外泌体形态,纳米粒子追踪仪分析外泌体粒径分布情况。使用PKH26及DAPI荧光染料对外泌体及胆管癌细胞进行染色,并在激光共聚焦显微镜下观察外泌体摄取情况。随后使用孵育和超声法装载5-Fu建立外泌体载药系统。使用BCA法和高效液相色谱法测定装载物中外泌体和5-Fu的浓度,计算得出装载效率。最后运用CCK-8实验法检测外泌体、5-Fu及装载5-Fu外泌体对胆管癌细胞（QBC939）活力的影响。结果:从间充质干细胞提纯的外泌体具有典型的双层结构,大小约100nm,并且其特异蛋白标记物均高表达。共聚焦显微镜下发现外泌体位于细胞质内,表明其被QBC939细胞系摄取。成功运用孵育及超声法装载5-Fu至外泌体,并且发现超声法装载效率优于孵育法（*p＜0.001）。在CCK-8实验中,与游离5-Fu组相比,装载5-Fu外泌体实验组（5-Fu-Exos）的细胞活性显著降低（*p＜0.01）,并且5-Fu-Exos组的IC50值更低。结论:1.对于外泌体装载5-Fu的方法而言,超声法装载效率优于直接孵育法。2.装载5-Fu的外泌体相较于游离5-Fu更有效抑制胆管癌细胞的增殖。本实验在细胞学水平揭示了使用外泌体载药系统递送化疗药物有可能成为治疗胆管癌的有效手段,并可以提高药物疗效、减少药物毒副作用。