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【目的】拟探讨广西产何首乌蒽醌类化合物GXHSWAQ-1对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及其可能的作用机制,为开发传统中药何首乌临床应用提供理论基础。【方法】体外应用浓度梯度递增结合低剂量持续诱导法,诱导出卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3/DDP,计算细胞的耐药倍数,探讨其多药耐药性;以卵巢癌亲本细胞SKOV3和多药耐药细胞株SKOV3/DDP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法观察GXHSWAQ-1在无细胞毒浓度下对卵巢癌细胞耐受顺铂(DDP)和卡铂(CBP)的逆转作用;采用流式细胞仪分析GXHSWAQ-1对细胞周期调控、细胞凋亡以及活性氧(ROS)的影响;用Real-time PCR技术检测耐药相关基因HIF-1α、STAT1、GSTP1 mRNA表达情况;用Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达情况。【结果】1.耐药倍数测定:MTT法检测到DDP作用48h的SKOV3和SKOV3/DDP细胞IC50分别为8.6 mg/L和24.2mg/L,其耐药倍数为2.8;CBP作用48h的SKOV3和SKOV3/DDP细胞IC50分别为63.3 mg/L和266.7mg/L,其耐药倍数为4.2,表现出多药耐药性。2.GXHSWAQ-1对SKOV3和SKOV3/DDP细胞存活率的影响:GXHSWAQ-1对SKOV3和SKOV3/DDP细胞的抑制作用随浓度增高而增强。7.8mg/L以下浓度(含7.8mg/L)的GXHSWAQ-1作用时,SKOV3和SKOV3/DDP细胞的抑制率均小于10%,可视为无细胞毒性浓度。3.GXHSWAQ-1对SKOV3/DDP细胞的耐药性逆转作用:无细胞毒作用的7.8 mg/L和3.9 mg/L GXHSWAQ-1能逆转SKOV3/DDP细胞对DDP或CBP的耐药性,对DDP的逆转倍数分别为1.91倍和1.30倍,对CBP的逆转倍数分别为2.59倍和1.84倍。4.GXHSWAQ-1对SKOV3/DDP细胞凋亡、细胞周期调控以及活性氧(ROS)的影响:7.8 mg/L GXHSWAQ-1联合IC50浓度的DDP或CBP时,SKOV3/DDP细胞的凋亡率高于单独DDP或CBP作用组(P<0.01),G0-G1期细胞数减少(P<0.01),S期和G2-M期细胞增多(P<0.01)。GXHSWAQ-1可诱导SKOV3/DDP细胞ROS含量升高,具有剂量依赖性;7.8 mg/L GXHSWAQ-1联合IC50浓度的DDP或CBP时,ROS的含量均明显高于单独DDP或CBP作用组(P<0.01)。5.GXHSWAQ-1对SKOV3/DDP细胞HIF-1α、STAT1、GSTP1 mRNA表达的影响:与SKOV3比较,SKOV3/DDP细胞的HIF-1α、STAT1、GSTP1 mRNA表达明显升高(P<0.01)。3.9mg/L和7.8mg/L GXHSWAQ-1作用均可下调HIF-1α、STAT1 mRNA表达,存在剂量-效应依赖关系。7.8mg/L GXHSWAQ-1作用可下调GSTP1 mRNA表达,但3.9mg/L GXHSWAQ-1作用不明显。7.8mg/L GXHSWAQ-1联合IC50浓度的DDP或CBP时,三个耐药相关基因的表达与单独化疗药组作用相比明显下调(P<0.01)。6.GXHSWAQ-1对SKOV3/DDP细胞HIF-1α蛋白表达的影响:与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP的HIF-1α蛋白表达明显升高(P<0.01);单纯DDP或CBP对SKOV3/DDP细胞的HIF-1α改变不明显;3.9 mg/L～15.6 mg/L GXHSWAQ-1可使SKOV3/DDP细胞HIF-1α蛋白表达下降,存在剂量-效应依赖关系。7.8 mg/L GXHSWAQ-1联合IC50浓度的DDP或CBP时,HIF-1α蛋白表达与单独DDP或CBP组比较明显下降(P<0.01)。【结论】1.成功的诱导筛选了顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP,为研究逆转卵巢铂类耐药提供了体外试验模型。2. GXHSWAQ-1可部分逆转SKOV3/DDP细胞对DDP或CBP的耐药性。在一定浓度范围内,其逆转作用依浓度增加而增强。3. GXHSWAQ-1能使细胞周期阻滞在对化疗药物敏感的S期和G2-M期,还能通过升高活性氧增强化疗药物引起的肿瘤细胞凋亡,其作用可能涉及到HIF-1和GSTP1等基因表达下调以及对STAT1信号传导通路的抑制。