基于代谢组学的炙淫羊藿炮制机理研究

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淫羊藿-----我国的传统补益中药,最初记载于《神农本草经》上,其具有补肾壮阳,强健筋骨,祛除风湿的疗效。临床上常采用羊脂油对淫羊藿进行炮制,疗效显著。本课题组前期研究表明:体内外实验结果显示,淫羊藿中所含黄酮苷的吸收渗透系数存在差异性;同时还发现炮制过程中的“加热”作用可以促使淫羊藿产生更多易于吸收的生物活性黄酮(例如淫羊藿苷以及宝藿苷Ⅰ)。这些研究均是从肠吸收角度来阐释淫羊藿的炮制机理,但是淫羊藿炮制后的药效物质基础及其补肾壮阳增效机制仍不清楚,需要进一步研究。因此,本文基于代谢组学,整体上研究了淫羊藿炮制后化学成分的变化及其补肾壮阳的增效机制。从植物代谢组学方面,比较研究了淫羊藿炮制前后次生代谢产物的差异,期望找出炙淫羊藿的物质基础;从药物代谢组方面研究朝藿定A、箭藿苷B、宝藿苷Ⅰ在大鼠体内的代谢产物及其代谢途径,以期寻找淫羊藿炮制后的增效物质基础;基于生物代谢组学,研究了肾阳虚潜在的生物标志物,比较了淫羊藿生品与炮制品对肾阳虚大鼠血浆代谢谱的调节作用,以期从整体上评价炙淫羊藿补肾助阳的增效机制。  本论文对炙淫羊藿的炮制机理研究、代谢组学的概况和其在中药及其炮制中的应用进行了综述,实验环节主要分为以下几个部分:  (1)采用纤维素酶水解朝藿定B的方法制备箭藿苷B,酶解反应的最佳工艺为pH5.6、温度50℃、酶与底物的质量比0.6、底物质量浓度20 mg·mL-1和反应时间24 h。该方法简单可行,产物转化率高,为后续代谢实验奠定物质基础。  (2)先采用UPLC-QTOF-MS技术研究了淫羊藿生品和炮制品的指纹图谱变化,共标出40个化合物,解析出32个,均为黄酮类化合物;在此基础上基于代谢组学,采用正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法比较了淫羊藿炮制前后次生代谢产物的差异,确定了11个显著性差异次生代谢产物,并鉴定了其中9个,分别为8-乙烯-山奈酚,淫羊藿素,淫羊藿次苷Ⅰ/淫羊藿素-3-O-glc,异戊醇基箭藿苷B,淫羊藿素-3-O-rha2(4-OAc)-glu(2OAc),1,3-异戊二烯基朝藿定C和1,3-异戊二烯基-箭藿苷B-7-O-GluA。  (3)采用UPLC/Q-TOF分析技术鉴定三糖苷(朝藿定A)、二糖苷(箭藿苷B)和单糖苷(宝藿苷Ⅰ)吸收进入大鼠体内的代谢产物,并阐明这些代谢产物在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中的代谢途径,进而从定性角度阐明朝藿定A、箭藿苷B和宝藿苷Ⅰ在大鼠体内的代谢规律。  (4)基于生物代谢组学方法,建立氢化可的松肾虚模型并采用正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法,确定了肾阳虚潜在的生物标志物9个,鉴定出其中5个生物标志物,分别为硬脂酰溶血卵磷脂、十六烷基甘油磷脂酰胆碱、花生四烯酰基溶血卵磷脂、亚油酰基甘油磷脂酰胆碱、十六烷酸溶血磷脂酰胆碱;在此基础上采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法比较了淫羊藿生品与炮制品干预后肾阳虚大鼠血浆中这些生物标志物的差异和水平变化,同时将这些标志物输入KEGG数据库中构建代谢通路,进而从整体上评价炙淫羊藿补肾助阳的增效作用及其机制。  综上所述,本文围绕炮制机理,整体上研究了淫羊藿炮制后的化学成分变化和补肾壮阳作用的增效机制,从代谢组学角度深入研究了炙淫羊藿的炮制机理,为探索中药炮制机理提供新的思路与方法。  
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