麦麸阿魏酸糖酯的制备及其抗氧化活性研究

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本课题以小麦麸皮为原料,采用酶法粗提、大孔吸附树脂D-101纯化制备阿魏酸糖酯,并进行了阿魏酸糖酯的化学和细胞抗氧化活性研究。实验方法和结果如下:(1)利用ViscozymeL酶和木聚糖酶混合酶处理麦麸膳食纤维制备阿魏酸糖酯。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法对阿魏酸糖酯的提取工艺进行优化。试验结果确定阿魏酸糖酯的最佳提取工艺条件为:Viscozyme L酶:木聚糖酶为1:2,酶添加量4 g/L,温度48℃,反应时间4 h。D-101大孔吸附树脂纯化阿魏酸糖酯的最佳条件为:上样量50 m L,一次性过柱,不延长吸附时间,选择50%的乙醇作为洗脱剂,洗脱剂量为60 m L。(2)研究了阿魏酸糖酯的化学抗氧化活性。实验结果表明:阿魏酸糖酯具有一定的还原力;它对蛋白质非酶糖基化反应产物AGEs的生成和肝匀浆的自氧化具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,对AGEs生成的抑制作用的IC50为1.28×10-5 mol/L;阿魏酸糖酯对DPPH·清除作用的IC50为1.03×10-5 mol/L;阿魏酸糖酯对Fe2+、Cu2+具有一定的螯合作用,其IC50分别为5.61×10-6 mol/L、5.64×10-6 mol/L。(3)基于高糖诱导肝细胞氧化应激模型的建立,进行阿魏酸糖酯的细胞抗氧化活性研究。①高糖诱导细胞氧化应激模型的建立。利用不同浓度的葡萄糖处理HepG2细胞,通过测定细胞存活率、氧化损伤及糖脂代谢,确定葡萄糖的最佳作用时间和浓度,建立高糖诱导肝细胞氧化应激模型。结果表明,通过测定各个细胞指标,确定成功建立高糖损伤肝细胞模型的条件为:高糖损伤浓度30 mmol/L,诱导时间48 h。②阿魏酸糖酯的细胞抗氧化活性研究。在高糖诱导肝细胞氧化应激模型建立的基础上,将细胞随机分为正常组、模型组、低、中、高浓度阿魏酸糖酯干预组进行阿魏酸糖酯的细胞抗氧化活性研究。结果表明:与模型组相比,低、中、高浓度阿魏酸糖酯干预组均可显著降低细胞内ROS含量,提高CAT活力;中、高浓度阿魏酸糖酯干预组可显著降低细胞内TG含量,提高GSH-PX活力;模型组的T-SOD活力为44.83±0.09 U/mgprot,高浓度组的T-SOD活力为48.05±1.40 U/mgprot,与模型组相比具有极显著差异。实验结果表明:阿魏酸糖酯可显著提高高糖损伤细胞中的抗氧化酶类(T-SOD、CAT、GSH-PX)活性,减少细胞中ROS、脂类等的含量,说明阿魏酸糖酯对高糖损伤的肝细胞具有保护作用,阿魏酸糖酯具有一定的细胞抗氧化活性。
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