热射病对大鼠认知功能的影响及其与铁代谢相关机制的研究

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目的本实验分三部分,第一部分:通过建立不同时间点热射病大鼠模型,评价其认知功能改变的情况;第二部分:通过对不同时间点热射病大鼠海马CA1区锥体细胞计数,探讨热射病后认知能力受损的机制,并提供一种可行的评价脑组织损伤严重程度的方法;第三部分:研究铁含量及铁代谢相关蛋白在热射病大鼠海马中变化的情况,初步探讨热射病认知功能损害的相关机制。方法实验动物分为手术对照组(Sham)、热射病即刻组(HS0)、热射病7天组(HS7)及热射病21天组(HS21)。建立热射病大鼠模型。第一部分:各组大鼠在指定时间点进行Morris水迷宫试验,比较各组学习、记忆能力改变的情况;第二部分,各组大鼠在指定时间进行脑组织冰冻切片,Nissl染色,计数海马CA1区锥体细胞数量改变情况;第三部分,各组大鼠在指定时间留取海马组织标本,应用火焰原子吸收光谱法检测热射病后海马内铁含量的变化,应用Real time PCR法检测Fpn1 m RNA在各组间相对表达含量的差异,应用Western blot法检测Hepcidin、Fpn1蛋白含量在各组间的相对含量变化。结果第一部分:各组大鼠Morris水迷宫实验中游泳速度进行对比,P>0.05,无统计学差异,表明热射病对大鼠运动能力没有造成太大影响。定位航行试验中,随着时间的推移,各组大鼠逃避潜伏期呈现逐渐缩短的趋势,从第三日开始趋于稳定。与Sham组对比,HS7组第1-5日的逃避潜伏期明显延长(P<0.05),HS21组第1-3日逃避潜伏期平均值仍高于Sham组,但无统计学差异,第4-5日逃避潜伏期延长(P<0.05);与HS7组对比,HS21组第1-2日逃避潜伏期成绩好于HS7组,但无统计学差异,第3-5日逃避潜伏期较HS7组缩短(P<0.05)。空间探索实验中,与Sham组比较,HS7组大鼠目标象限停留时间百分比及穿越平台次数明显减少(P<0.01),HS21组穿越平台次数明显减少(P<0.01),目标象限停留时间百分比无显著差异;与HS7组比较,HS21组目标象限停留时间百分比有所增加(P<0.01),穿越平台次数无显著差异。第二部分:与Sham组比较,HS7、HS21组海马CA1区锥体细胞数目显著减少(P<0.05),HS21组细胞计数也显著低于HS7组(P<0.05)。第三部分:各实验组海马内铁含量较对照组显著升高(P<0.05)。与Sham组比较,HS0、HS7、HS21组Fpn1蛋白含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);与HS0组比较,HS7组蛋白含量稍有升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Sham组比较,HS7、HS21组Fpn1 m RNA含量均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与HS0组比较,HS7、HS21组Fpn1 m RNA含量均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Sham组比较,HS0、HS7及HS21组Hepcidin蛋白含量均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);HS0、HS7及HS21三组间差异无统计学意义(P>0.05);结论1.热射病可引起大鼠认知功能受损,早期重,并可能在后期部分改善,但未完全恢复正常;2.热射病后海马组织CA1区锥体细胞数量存在缺失,可能是导致学习、记忆受损的原因之一;3.热射病可引起大鼠海马内Hepcidin表达上调,进而引起Fpn1降解过多,最终导致铁在细胞内聚集,可能是引起海马受损进而导致认知功能障碍的原因之一。
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