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益生芽孢杆菌作为饲料添加剂对鱼类具有促进生长以及增强抗病力的作用,但目前水产养殖中来自鱼源的益生芽孢杆菌添加剂的种类较少。因此,开发鱼源益生芽孢杆菌以及验证其对鱼类产生的影响是解决该问题的主要途径之一。为探究洛氏鱥(Rhynchocypris lagowskii Dybowski)源贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)对宿主自身是否产生积极影响,本研究将分离自洛氏鱥肠道的贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5作为饲料添加剂,以洛氏鱥(体质量:9.98±0.05 g)为研究对象。贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5的添加量分别为CK(0 CFU/g)、B-6(1.0×10~6CFU/g)、B-7(1.0×10~7CFU/g)、B-8(1.0×10~8CFU/g)和B-9(1.0×10~9CFU/g)。通过56 d的养殖试验和14 d的攻毒试验,探究贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5对洛氏鱥生长性能、消化酶活性、肠道菌群结构、抗氧化能力、免疫力以及抗嗜水气单胞菌感染的影响,验证洛氏鱥源贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5对洛氏鱥的益生作用。本研究共包括三部分,结果如下:(1)贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5对洛氏鱥生长性能的影响本试验结果显示:在试验的第28 d,与对照组相比,处理组洛氏鱥的增重率、特定生长率、饲料系数、肝体比、肠长指数均无显著差异(P>0.05);B-7组洛氏鱥的肥满度显著高于对照组(P<0.05);B-8和B-9组洛氏鱥的脏体比显著高于对照组(P<0.05);B-7、B-8和B-9组洛氏鱥的肠体指数显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,B-7组洛氏鱥肝胰脏的胰蛋白酶、淀粉酶和碱性磷酸酶活性活性均显著升高(P<0.05);处理组洛氏鱥肠道的消化吸收酶(胰蛋白酶、淀粉酶、γ谷氨酰转移酶、Na+-K+-ATP酶和碱性磷酸酶)活性呈显著升高趋势(P<0.05)。在试验的第56 d,B-7、B-8和B-9组洛氏鱥的终末体重、增重率、特定生长率显著高于对照组(P<0.05);处理组洛氏鱥的饲料系数显著低于对照组(P<0.05);B-8组洛氏鱥的肝体比显著高于对照组(P<0.05);贝莱斯芽孢杆菌对洛氏鱥的脏体比、肥满度、肠长指数、肠体指数无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,处理组洛氏鱥肝胰脏和肠道的消化吸收酶活性呈显著升高趋势(P<0.05)。B-7和B-8组洛氏鱥肌肉中粗蛋白质含量显著高于对照组(P<0.05)。洛氏鱥肠道菌群结构的结果显示,肠道内微生物的Alpha指数相比对照组均无显著差异(P>0.05);洛氏鱥肠道中主要微生物组成为变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、梭杆菌门(Fusobacteria)。其中,变形菌门、拟杆菌门、梭杆菌门的丰度呈先升高后降低的趋势,厚壁菌门的丰度呈相反的趋势。根据回归分析,得到贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5的适宜添加剂量为5.00×10~8CFU/g。(2)贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5对洛氏鱥抗氧化能力的影响本试验结果显示:在试验的第28 d,与对照组相比,B-8组洛氏鱥肝胰脏的过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05);处理组洛氏鱥肠道的还原型谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)呈显著升高趋势(P<0.05);洛氏鱥肠道的丙二醛(MDA)含量呈显著下降趋势(P<0.05)。在试验的第56 d,与对照组相比,处理组洛氏鱥肝胰脏和肠道的GSH含量、CAT、GSH-Px、SOD和T-AOC活性呈显著升高趋势(P<0.05);洛氏鱥肝胰脏和肠道的MDA含量呈显著下降趋势(P<0.05)。贝莱斯芽孢杆菌显著上调了B-7、B-8和B-9组洛氏鱥肝胰脏和肠道的CAT mRNA、GSH-Px mRNA和CuZn-SOD mRNA的相对表达量(P<0.05),同时显著上调B-7、B-8组洛氏鱥肌肉CAT mRNA、GSH-Px mRNA和CuZn-SOD mRNA的相对表达量(P<0.05)。(3)贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5对洛氏鱥免疫力的影响本试验结果显示:在试验的第28 d,B-7、B-8和B-9组洛氏鱥血清的溶菌酶(LZM)和免疫球蛋白M(IgM)含量显著高于对照组(P<0.05);B-7组洛氏鱥血清的酸性磷酸酶(ACP)活性显著高于对照组(P<0.05)。在试验的第56 d,所有处理组洛氏鱥血清的LZM和IgM含量均显著高于对照组(P<0.05);B-8和B-9组洛氏鱥血清的C3含量和AKP活性显著高于对照组(P<0.05);B-8组洛氏鱥血清的C4含量显著高于对照组(P<0.05);B-7组洛氏鱥血清的ACP活性显著高于对照组(P<0.05)。B-8组洛氏鱥肝胰脏的TGF-βmRNA和IL-10 mRNA的表达量显著高于对照组(P<0.05);B-8和B-9组洛氏鱥肝胰脏的IL-8 mRNA、IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达量显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,处理组洛氏鱥肠道的TGF-βmRNA和IL-10 mRNA的表达量呈显著的上升趋势(P<0.05);洛氏鱥肠道的IL-8 mRNA、IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达量呈显著的下降趋势(P<0.05)。B-7和B-8组洛氏鱥肌肉的TGF-βmRNA和IL-10 mRNA的表达量显著高于对照组(P<0.05);B-7、B-8和B-9组洛氏鱥肌肉的IL-8 mRNA、IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达量显著低于对照组(P<0.05)。感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)后的第14 d,与对照组相比,处理组的存活率均显著提高(P<0.05),其中B-8组的存活率最高。处理组洛氏鱥血清的LZM、C3、IgM含量显著高于对照组(P<0.05);B-7、B-8、B-9组洛氏鱥血清的C4含量显著高于对照组(P<0.05),B-6组C4含量也有升高趋势但不显著(P>0.05);四个处理组洛氏鱥血清的ACP和AKP活性均均显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,添加1.0×10~7~1.0×10~9CFU/g洛氏鱥源的贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5能够促进洛氏鱥生长,促进洛氏鱥的抗氧化能力和免疫力,增强其抗病力。综合考虑,在本试验条件下,建议贝莱斯芽孢杆菌LSG2-5在洛氏鱥饲料中的适宜添加剂量为5.00×10~8CFU/g。