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叶绿素广泛存在于高等植物、藻类及光合细菌中,对于叶绿素降解的研究一直是人们极关心的课题。在植物生长发育后期,叶片衰老或果实成熟时在叶绿素酶的作用下叶绿素发生大规模的自发降解。
在当代社会中有相当一部分的工业原材料、食品、保健品及药品来自于绿色植物。传统的人工去除或降解叶绿素的方法是物理吸附法和化学氧化法。由于传统的方法存在着一定的局限性,在一定程度上增加生产成本。目前工业上脱除叶绿素的方法主要有:①物理吸附法:包括大孔树脂吸附法和活性炭吸附法;②化学氧化法:包括双氧水氧化法和次氯酸钠氧化法。两种降解叶绿素方法都有一定的局限性,主要表现在废弃树脂难以重复利用,化学残留等问题。
针对上述情况,本文提出一种全新的降解叶绿素的方法-微生物降解。微生物降解具有绿色环保,对环境危害小等特点。要实现微生物对叶绿素有效的降解,筛选分离对叶绿素有高降解能力的菌株是关键。
本研究以常年堆积腐烂树叶的土壤为优质菌源,在只含有叶绿素为营养成分的培养基进行筛选,以培养基上出现降解透明圈和在叶绿素水溶液中的降解效果相结合,筛选分离到一株对叶绿素有高降解能力的菌株。
本文主要围绕微生物降解叶绿素做了如下工作,主要成果如下:
1.筛选了一株对叶绿素具有高降解能力的菌株,并将该菌株保存在中国典型培养物保存中心(武汉),保藏编号为CCTCC NO:M2011101。
2.经过形态学鉴定它为曲霉属,命名为GLHZB319,并发现它与一般的曲霉不同,该菌株的菌丝没有膈。
3.叶绿素降解条件优化:该菌株具有降解快速,降解率高,对降解条件不苛刻等特点。最适降解温度为30℃,最适降解pH为7,最佳摇床转速为100r/min。当叶绿素吸光度大于0.5时,对菌株生长和叶绿素降解有抑制作用,通过装液量的考察发现该菌株属于兼性好氧菌。
4.生物学特性分析:最适产孢子pH为6,在培养基中添加蔗糖对产孢量和产色素有明显的促进作用,孢子的致死温度为65℃,时间为15min。光照强弱对菌丝生长影响不明显。
5.该菌株对剑麻麻丝表而残留的叶绿素具有较好的降解作用,剑麻麻丝经过该菌株发酵降解后,麻丝变白变软,在显微镜的下已经观察不到叶绿素。