【摘 要】
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本试验旨在了解气肿疽梭菌的抗原特性,提取经过厌氧培养的气肿疽梭菌菌体及其分泌的毒素,粗提体抗原为气肿疽梭菌标准菌株(C54-1)经过超声波裂解后制备而成,粗提分泌抗原由毒
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本试验旨在了解气肿疽梭菌的抗原特性,提取经过厌氧培养的气肿疽梭菌菌体及其分泌的毒素,粗提体抗原为气肿疽梭菌标准菌株(C54-1)经过超声波裂解后制备而成,粗提分泌抗原由毒素经饱和硫酸铵处理制备而成,再分别通过Sephadex G-200凝胶柱分离纯化后,应用垂直凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹实验(Western blotting)对气肿疽梭菌粗提及纯化的菌体抗原和分泌抗原进行反应原性分析。结果表明,气肿疽梭菌的体抗原有八个明显的蛋白峰,电泳图谱上分别出现了与之相对应的条带,分子质量分别为93kD、72kD、56kD、46kD、38kD、26kD、15kD、11kD,其中第二(72kD)、五(38kD)、六(26kD)峰的抗原表现出明显的特异性。分泌抗原有七个主要蛋白峰,应用垂直凝胶电泳(SDS-PAGE)后,呈现明显的蓝色条带的是第二、第三、第五、第七蛋白峰,蛋白质分子质量分别为93kD、70kD、48kD和32kD,用免疫印迹技术分析气肿疽菌体抗原及分泌蛋白的抗原组分发现,小鼠感染气肿疽梭菌的阳性血清能与抗原组分蛋白起反应,其中菌体抗原72kD、38kD、26kD蛋白带显色最深,分泌抗原93kD和48kD呈现出特异性条带。将纯化的特异性菌体及分泌抗原加入佐剂,免疫小白鼠(25g/只),并增设对照组,利用琼脂扩散实验原理,对纯化的气肿疽梭菌特异性蛋白抗原做免疫原性分析。结果表明,特异性气肿疽梭菌菌体抗原产生的抗体效价最高可以达到1:64,比粗提全菌抗原所产生的效价高;气肿疽梭菌特异性分泌抗原所产生的抗体效价最高可以达到1:64,比单纯细菌培养上清液所产生的效价高。此实验说明纯化的特异性菌体和分泌抗原具有良好的免疫原性。本研究确定了气肿疽梭菌的菌体抗原和分泌抗原中具有较好的反应原性和免疫原性的抗原,为以后气肿疽血清学诊断方法的建立和疫苗的研制提供实验依据。
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