病毒核酸提取方法的研究及其在诊断试剂中的应用

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本研究目的是建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度的血液病毒核酸的全自动提取方法,能同时提取血液核酸中的DNA和RNA病毒,为核酸临床自动化定量检测提供有效支撑。本文以乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)和丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)的提取为例,先对各磁珠种类进行了筛选,并对提取试剂的各组分关键因素进行了优化,包括磁珠的加样量、裂解液中胍盐的浓度、pH值,核酸的结合条件和洗涤条件等;在此基础上通过临床阳性血清样本,从定量线性范围、精密度、抗污染、灵敏度、特异性和抗干扰能力等方面对自动化磁珠核酸提取法及优化试剂进行了全面的性能评估,最后分别与目前市场应用较广的煮沸法和行业内的“金标准”Roche COBAS TaqMan Test进行了定量相关性分析。并通过内标和外标分别对检测过程进行了全程的监控和样本的定量。结果显示:通过一系列的优化,该方法在定量线性范围、精密度、抗污染、灵敏度、特异性和抗干扰能力均已达到国家对临床定量诊断试剂的要求,且与煮沸法和Roche COBAS TaqManTest都具有显著的相关性。采用以磁珠法为基础的核酸自动化提取方法,核酸得率高、具有较宽的检测范围、定量准确、操作简单,可做为实验室首选的核酸提取方法,并可应用于临床诊断。
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