麻枳降浊方改善便秘型肠易激综合征模型大鼠肠组织中5-HT的实验研究

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目的:应用冰水灌胃法建立便秘型肠易激综合征大鼠模型,给予麻枳降浊方中药复方、复方芦荟胶囊及西沙必利对该模型进行干预,通过观察大鼠的一般情况、体重、大便含水量、小肠推进比、肠道的病理形态学变化以及肠道组织中5-HT的表达水平,来探讨5-HT与便秘型肠易激综合征的关系,以及麻枳降浊方中药复方对便秘型肠易激综合征大鼠肠道的保护作用和其作用产生的可能机制,为临床上中医药治疗便秘型肠易激综合征提供实验依据。方法:健康雄性wistar大鼠45只,清洁级,体重140±20g,每只大鼠分笼独立饲养,适应性饲养一周。观察大鼠粪便形态和含水量,均为正常者用于实验。第二周将45只健康雄性wistar大鼠随机分为造模组和正常组(N),造模组37只,采用冰水灌胃方法造模;正常组8只,普通饲养、饮水。造模期给予每只造模大鼠2ml冰水混合物(0-4℃生理盐水)灌胃,每日1次,从上午8:30开始,共14天,正常饲食、饮水。造模成功(成功的标准是:粪便形态、粪便质地及含水量的改变)后将造模组随机分为4组:西药对照组(X)、中成药对照组(Z)、麻枳降浊方组(F)、模型组(M),每组各8只。模型成模一周后开始给药,药物剂量按照体表面积换算,X组大鼠给予西沙必利3.6mg/kg/d灌胃,Z组大鼠给予复方芦荟胶囊0.36g/kg/d灌胃,F组大鼠给予麻枳降浊方中药配方颗粒6.3g/kg/d灌胃,M组大鼠给予蒸馏水2ml/d灌胃,N组大鼠不予灌胃,共2周。末次给药后,大鼠禁食24h,正常饮水,准备留取标本。试验开始前30min,每只大鼠灌胃4ml碳末。采用断头取血法处死大鼠,处死后迅速开腹取出全胃肠组织,用直尺测量从幽门到碳末前端的长度,以及幽门到回盲部的距离。然后迅速取各组大鼠的回盲部、结肠(距肛门5cm)、小肠(距回盲部5cm)各0.5cm,立即用生理盐水冲洗,l0%的中性缓冲福尔马林液固定。在光镜下观察肠道组织的病理改变,用免疫组化法观察肠道组织5-HT的表达。结果:1实验大鼠的一般状况比较正常组大鼠精神良好,反应敏捷,眼睛有神,肌肉丰满,皮毛光泽柔顺,尾不弯曲,无畸形,饮食正常,粪便呈麦粒状,长约0.9cm,黄褐色,粪便质地较软,易掰开,尿量正常。造模组大鼠精神可,较紧张,反应过激,眼睛有神,肌肉丰满,皮毛稍干枯毛躁,尾不弯曲,无畸形,饮食正常,粪便多呈小黄豆状,可与麦粒状粪便夹杂相见,长约0.4-0.6cm,灰褐色或灰白色,粪便质地稍硬,个别不能掰开,尿量正常。在试验过程中,不同阶段均未见大鼠死亡,整个试验过程中未见大鼠出现腹泻情况。造模过程中,1只大鼠出现原发性右眼白内障,1只大鼠逃逸过程中被鼠笼划伤,为了减少影响因素,予以剔除。2粪便含水量结果显示:灌冰水14天后,造模组大鼠粪便含水量较正常组大鼠粪便含水量减低,证明造模成功。灌药14天后,模型组大鼠粪便含水量较正常组低(P>0.05),复方芦荟胶囊治疗组大鼠、西沙必利治疗组大鼠、麻枳降浊方治疗组大鼠粪便含水量较模型组增高(P<0.05),各治疗组之间未见差异(P>0.05)。3小肠推进比结果显示:灌药14天后,模型组大鼠小肠推进比较正常组减低(P<0.05),复方芦荟胶囊治疗组大鼠、西沙必利治疗组大鼠、麻枳降浊方治疗组大鼠小肠推进比较模型组均增高(P<0.05),各治疗组大鼠小肠推进比较正常组减低(P<0.05)。4肠道病理学形态观察结果显示:各组大鼠不同肠组织结构清楚,粘膜层完整,均未见充血、水肿、炎细胞浸润、糜烂及溃疡等明显异常。5免疫组织化学方法检测肠道组织中5-HT的表达结果显示:灌药14天后,在小肠(距回盲部5cm)中:模型组大鼠肠组织中5-HT含量较正常组升高(P<0.05),复方芦荟胶囊治疗组大鼠、西沙必利治疗组大鼠、麻枳降浊方治疗组大鼠肠组织中5-HT含量较模型组减低(P<0.05),各治疗组大鼠肠组织中5-HT含量较正常组升高(P<0.05),各治疗组之间肠组织中5-HT含量未见差异(P>0.05)。在回盲部中:模型组大鼠肠组织中5-HT含量较正常组升高(P<0.05),复方芦荟胶囊治疗组大鼠、西沙必利治疗组大鼠、麻枳降浊方治疗组大鼠肠组织中5-HT含量较模型组减低(P<0.05),各治疗组大鼠肠组织中5-HT含量较正常组升高(P<0.05),各治疗组之间肠组织中5-HT含量未见差异(P>0.05)。在结肠(距肛门5cm)中:模型组大鼠肠组织中5-HT含量较正常组升高(P<0.05),复方芦荟胶囊治疗组大鼠、西沙必利治疗组大鼠、麻枳降浊方治疗组大鼠肠组织中5-HT含量较模型组减低(P<0.05),各治疗组大鼠肠组织中5-HT含量较正常组升高(P<0.05),各治疗组之间肠组织中5-HT含量未见差异(P>0.05)。结论:1便秘型肠易激综合征大鼠成模后出现了粪便变小、质地变硬及含水量减低的情况,治疗后大鼠粪便形状变大,质地变软,含水量明显增加。2麻枳降浊复方中药能够提高大鼠的小肠推进比,改善大鼠的胃肠蠕动情况,从而对便秘情况起到治疗作用。可能为其治疗便秘型肠易激综合征的作用机制之一。3麻枳降浊复方中药能够降低大鼠肠道组织中5-HT的表达,此作用和西沙必利的功能相似,可能为其治疗便秘型肠易激综合征的作用机制之一。4虽然治疗组各项情况较模型组明显减轻,但是并未达到正常组标准。故认为两周的治疗时间仅是一个显效,若要达到治愈标准,应该适当延长治疗时间。
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