目的:研究建立生物检材中5种常见局麻药灵敏度高、操作简便的分析方法;分析大鼠以两种不同给药方式急性中毒后体内丁卡因的分布规律。具体内容包括:1.建立生物检材中5种常见局麻药的联合分析方法。2.建立丁卡因静脉注射中毒致死和舌下粘膜给药中毒的动物模型,观察大鼠中毒表现,对丁卡因以两种不同方式在体内的分布进行检测,获得分布排序和重要毒理学数据。3.研究丁卡因以两种方式中毒致死在体内各脏器、体液中的分布特点以及规律,为丁卡因中毒或死亡案件的检材采集、检测、结果分析、死因判定等法医学鉴定提供参考以及科学依据。方法:1. 5种局麻药的定性分析气相色谱分析方法的建立:分析样品中准确添加5种局麻药,在一定PH条件下用乙醚萃取,气相色谱检测,根据局麻药的保留时间(tr值)定性。2.丁卡因的定量分析配制丁卡因和内标物利多卡因的标准工作溶液系列,用气相色谱法进行检测:以丁卡因的浓度为横坐标(X),丁卡因与利多卡因的峰面积之比为纵坐标(Y)进行线性回归,得回归方程Y=a+bX,以此对检材中的丁卡因浓度进行定量分析。3.丁卡因体内分布分布研究SD雌性大鼠24只,随机分为实验一组、实验二组、对照一组和对照二组,各组均为6只。实验一组大鼠按4倍LD50(LD50为10.39mg/kg)的剂量尾部静脉注射丁卡因溶液,实验二组大鼠按4倍LD50的剂量通过舌下粘膜给药,对照一组大鼠用等量生理盐水尾部静脉注射,对照二组大鼠用等量葡萄糖通过舌下粘膜给药。实验一组大鼠静脉注射后30min内发生抽搐后死亡,实验二组大鼠1min之内发生抽搐,30min后恢复正常。实验一组大鼠立即进行解剖,实验二组大鼠30min后空气栓塞处死,取血液、心、肝、肺、脑、肾、脾、胃,检测其中丁卡因的含量。对照组的大鼠所对应的样品为空白对照,经统计处理对所得的各数据排序,获得分布规律。结果1.检测结果5种局麻药在气相色谱中出峰先后顺序依次为:利多卡因、普鲁卡因、罗哌卡因、丁卡因、布比卡因。其中丁卡因在血液和肝脏中定量分析的线性范围分别是5.0～500.0μg/mL、5.0～500.0μg/g,最低检出限为血液0.5μg/mL、肝脏0.5μg/g(S/N≥3)。不同浓度的血液回收率为101.7±4.1%、99.6±5.4%、101.3±2.0%;日内、日间相对标准偏差分别小于5.2%、2.7%。2.症状实验一组大鼠在尾部静脉注射丁卡因后1～5min即开始抽搐、呼吸抑制,30min内全部死亡。实验二组大鼠舌下粘膜给药后出现兴奋不安、呼吸频率加快,20min后恢复正常。3.分布研究丁卡因在静脉注射实验组大鼠脏器和体液中的浓度大小分别依次是:心血>肝>胃>肺≈脾>心>脑≈肾。丁卡因在舌下粘膜给药实验组大鼠脏器和体液中的浓度大小分别依次是:脾>肾>肺>肝>心>心血>脑>胃。结论1.本实验所建立的气相色谱分析法可以同时测定5种常见局麻类药物,该方法快速便捷,高效准确,适用于医源性中毒检测和法医毒物分析。2.由丁卡因静脉注射致死和粘膜给药中毒的动物模型结果显示:经静脉注射丁卡因死亡的大鼠肝脏和血液中的浓度最高,是疑为注射丁卡因中毒的案件最好的分析检材;经舌下粘膜给药的大鼠脾脏和肾中的浓度最高,是疑为丁卡因粘膜中毒的案件最好的分析检材;实验表明经舌下粘膜给药实验组大鼠的血药浓度约是经静脉注射实验组大鼠的1/5。3.本实验研究丁卡因以两种方式中毒在体内各脏器、体液中的分布特点以及规律,可以为丁卡因中毒或死亡案件的检材采集、检测、结果分析、死因判定等法医学鉴定提供参考以及科学依据。