论文部分内容阅读
本研究对马氏珠母贝、近江牡蛎和华贵栉孔扇贝的性腺进行低温(4℃)冷冻保存。以二甲亚砜为抗冻剂对马氏珠母贝、近江牡蛎胚胎以及近江牡蛎、企鹅珍珠贝、华贵栉孔扇贝精子,进行超低温冷冻保存。本研究的目的是尝试建立贝类胚胎和精子超低温冷冻保存的基本程序。
主要研究内容为1.冷冻马氏珠母贝不同发育时期胚胎冷冻的研究:取不同发育时期的马氏珠母贝胚胎,加入抗冻保护液,经离液氮面不同高度平衡后投入LN中。经35℃水浴解冻胚胎,镜检观察存活率,将存活的胚胎和幼虫放入海水中培育,观察发育和存活情况;2.冷冻近江牡蛎胚胎冷冻的研究:对牡蛎胚胎进行液氮冷冻,一段时间后解冻观察牡蛎胚胎存活情况,将存活的胚胎和幼虫放入海水中继续培育,观察发育存活情况;3.企鹅珍珠贝、华贵栉孔扇贝和近江牡蛎精子冷冻的研究:取性腺发育良好的雄贝解剖,将成熟的精子加入抗冻保护液,冷冻保存一段时间后,经37~40℃水浴解冻,镜检存活情况,确定抗冻保护液的最佳浓度。4.马氏珠母贝、近江牡蛎和华贵栉孔扇贝雄性性腺组织的低温冷冻(4℃)研究:将成熟贝的雄性腺组织放入4℃冰箱保存一段时间后,经恢复至室温然后取精液观察其活力,并进行人工授精实验,确定其受精能力。
结果如下:
1.冷冻马氏珠母贝和近江牡蛎胚胎不同发育时期胚胎存活差别较大;各期胚胎以在液氮面中冷冻保存每隔十分钟降低十厘米,半小时之内投入液氮中冷冻保,解冻后得到胚胎存活率略高于其他两种冷冻方式。
2.得到精子冷冻存活率较高时抗冻保护液浓度:解冻后的精子,部分能够正常受精,受精卵正常发育,同步性较差。当抗冻保护液浓度为10%时,精子存活率较高。
3.4℃低温冷冻雄性性腺的低温耐受时间大约在两天,其活力与保存时间成线性关系,其存活的精子的受精能力与鲜精基本一致,受精卵能正常发育。
可得出以下结论:不同种生物胚胎的不同发育时期存活情况不同,随着胚胎发育,冷冻保存得到的胚胎存活率升高。各期胚胎以在液氮面中冷冻保存每个十分钟降低十厘米半小时之内投入液氮中冷冻保,解冻后得到其存活率较高;当抗冻保护液的浓度为10%时,冷冻保存几种贝类精子的存活率较高。几种贝的性腺在4℃下可保存两天,其存活精子受精能力不受影响。