牛蒡等中草药植物对柑桔全爪螨的杀螨活性研究

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柑桔全爪螨Panonychus citri(McGregor)是我国柑桔生产上最主要的害螨,世代历期短,繁殖力强、防治上用药频繁。随着螨类对化学药剂抗药性增强,农药的使用数量逐年增加,引起了人们对应用有毒化学品所导致的直接或间接潜在危险和危害的重视。因此,符合环保、健康理念的高效、低毒、低残留、与环境相容的农药成为当今农药研究的主题。其中,从天然植物中寻找杀螨成分,进行植物源农药的研究是最诱人也是最热门的话题。本文主要研究了牛蒡等广泛分布于我国各地区的15科30种中草药植物的杀螨活性,对牛蒡杀螨活性物质进行分离、纯化和鉴定,研究了部分杀螨作用机理,取得的主要实验结果如下:1.采用乙醇作为提取剂,超声波萃取法对30种中草药植物进行提取,室内生物测定方法评价其杀螨活性。结果表明,处理24h后,30种植物提取物(浓度为1g/ml)对柑桔全爪螨雌成螨、卵的触杀活性表明,大多数供试植物表现出较好的雌成螨触杀活性,没有发现对害虫有负杀虫效应的植物提取物。黄连、草乌、牛蒡、小茴香的校正死亡率大于90%,活性较高;白术、苦参、藁本、前胡、厚朴、羌活、川芎、五加皮、孔雀草、侧柏的校正死亡率为60%~90%,活性中等:其余植物提取物均活性较差。苦参、藁本、草乌、茴香提取物表现出较好的杀雌成螨活性,LC50在0.0658 g/L~0.1385 g/L之间,但杀卵的校止死亡率仅为3.775%~48.16%,LC50在144.1805 g/L~1628.90 g/L之间。牛蒡提取物对雌成螨、卵的触杀毒力的LC50值分别为0.0750 g/L和3.8562 g/L、产卵抑制率为75%,杀螨活性最佳。2.通过不同极性溶剂萃取法、柱色谱法和薄层层析分离技术对牛蒡乙醇提取物进行了活性成分分离,测定了不同分离组分对柑桔全爪螨的触杀活性。牛蒡乙醇提取物以氯仿作为溶剂的萃取率最高(1.85%),石油醚其次(0.63%),乙酸乙酯最低(0.23%)。3种萃取物经叶片浸渍法进行活性测定,石油醚部分触杀杀螨活性最强,LC50值为0.0801 g/L,氯仿部分的LC50值为1.8740 g/L,表明牛蒡有效成分主要存中于极性偏弱的石油醚、氯仿萃取部分。合并石油醚、氯仿组分,经大柱初分,中柱细分,最后分离出四个流分,经叶片浸渍法生物活性测定,流分L1-2对柑桔全爪螨的触杀毒力高达0.0025 g/L。经紫外吸收和颜色反应法鉴定,推测流分L1-2中含有共轭双键或三键。气相质谱—质谱联用鉴定结果显示,牛蒡萃取物L1-2组分中主要包括十六碳烷酸甲酯、十八碳烷酸甲酯、三十碳烷酸甲酯、三十一碳烷酸甲酯、十八碳二烯酸甲酯等9种主要成分,总含量达到85.32%;还有少量醛类、烯醇、烯烃类物质。3 L1-2组分(浓度为4.668μg/μl)处理后,柑桔全爪螨活动分为以下几个阶段:静止期(0~5h):螨明显静止,无明显反应;兴奋期(5~7h):运动不停,步态失调,站立不稳;螨体开始出现膨胀,大部分从暗红色变为鲜红色;痉挛期(7~14h):过度兴奋,虫身翻倒,八足交错摆动;螨体向一侧倾斜,足痉挛;停止颤抖,全足抽搐;少数扩散逃逸;排泄物极少,呈黑色;产卵量急剧下降;螨体颜色鲜亮;麻痹期(14~18h):螨体静止不动,身体开始萎缩;死亡期(18~24h):身体逐渐收缩至死亡。4研究了活性组分对CarE、AChE、GSTs三种螨类常见酶类的影响。结果表明:离体试验中,L1-2组分对柑桔全爪螨CarE、AChE、GSTs的比活力随着浓度的增加呈降低趋势,这表明L1-2组分对CarE、AChE、GSTs有显著的抑制作用,且处理间差异显著。活体试验中,L1-2组分对CarE有强烈的先激活再抑制的作用。12h前对CarE的作用效果表现为诱导作用,随着浓度的提高比活力分别增加了44.72%、33.13%、27.3%、17.34%、10.08%。12h后,当提取物浓度为0.2344μg/μl时,对CarE的作用效果表现为抑制,且随着浓度的增大抑制效果显著提高。处理12 h后,L1-2组分对柑桔全爪螨,AChE活力表现为诱导作用,随着浓度的升高比活力分别增加了27.95%、32.76%、30.63%、10.18%、3.69%。24h后,当L1-2组分浓度为0.4688×10-3μg/μl时,柑桔全爪螨AChE开始受到抑制,且随着浓度的升高抑制作用逐渐增强。当浓度为4688μg/μl时抑制作用急剧增强,达到64.07%。处理12h后,L1-2组分对柑桔全爪螨GSTs表现为抑制作用,随着浓度的提高而迅速上升。24h后,当L1-2组分浓度为0.2344×10-1时,对柑桔全爪螨GSTs抑制作用高达到38.94%。话体实验初期,活性成分对三种常见酶系的敏感性并不一致,对GSTs迅速表现为抑制作用。随着浓度的提高和时间的延长,对AChE、CarE抑制作用出现并迅速上升。表明L1-2组分对柑桔全爪螨三种常见酶系的作用与时间和浓度关系密切,随着时间的延长和浓度的增大,抑制作用逐渐增强。牛蒡为常用解表类中草药,植物资源丰富,其挥发油被认为是良好的保健食用油,作为植物源农药的来源相对安全。牛蒡含有的9,12-Octadecanoic acid methyl ester等不饱和脂肪酸,其杀螨活性成分属首次报道,对牛蒡中脂肪酸成分的开发利用和以脂肪酸为活性成分的杀螨剂的研发具有重大的意义。
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