爪哇黄芩素抑制HepG-2细胞侵袭迁移的机制研究

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众所周知,肝癌是很常见的一种恶性肿瘤,且具有高复发和高转移的特性,这对人民的生命健康产生极大的危害。肝癌的发生发展是多步骤与多因素的过程。因此我们需要寻找到新型药物能够有效的抑制肝癌的转移从而可以有效的控制患者的病情。中医药作为我国传统医学在肝癌的防治中发挥着十分重要的作用。爪哇黄芩(Scutellariajavanica Jungh.),唇形科,黄芩属。人们目前对爪哇黄芩的化学成分及药理作用知之甚少。我们从前期的实验中发现爪哇黄芩中含有许多黄酮类成分,并对这些黄酮类成分做了活性筛选。本课题组前期发现爪哇黄芩中的一种二氢黄酮类单体即爪哇黄芩素(5,6,2’-三羟基-7-甲氧基二氢黄酮)具有抗肿瘤作用,能够诱导HepG-2细胞凋亡。然而我们对其抗肿瘤的作用机制还不是很明确,所以无论从基础研究还是应用研究有必要对爪哇黄芩二氢黄酮成分抗肿瘤的作用及作用机制进行深入、系统的研究,尤其是对爪哇黄芩中二氢黄酮对抗肝癌机制的研究。论文主要研究爪哇黄芩素对HepG-2细胞侵袭迁移能力的影响并进一步探讨其机制。本实验采用Transwell小室法检测爪哇黄芩素作用于HepG-2细胞后其侵袭迁移能力的变化。Western blot法检测与侵袭迁移能力相关的分子(MMP-2、MMP-9及E-cadherin)以及与侵袭迁移相关信号通路PI3K/AKT和MAPK/ERK中关键分子(AKT、p-AKT、p-ERK1/2)的蛋白表达量。结果表明随着给药浓度的升高,HepG-2细胞的侵袭迁移力降低,呈剂量依赖性。这表明爪哇黄芩素抑制了 HepG-2细胞侵袭迁移能力。Western Blot检测MMP-2、MMP-9及E-cadherin蛋白表达量,结果显示MMP-2、MMP-9的表达下调,E-cadherin蛋白表达上调。进一步采用Western Blot检测PI3K/AKT信号通路中p-AKT和AKT的表达以及MAPK/ERK信号通路中p-ERK1/2的表达,结果表明,爪哇黄芩素能够下调p-AKT和p-ERK1/2的表达量,且呈剂量依赖性,而AKT表达量基本不变,说明爪哇黄芩素能够有效抑制PI3K/AKT信号通路和MAPK/ERK的激活。综上所述,爪哇黄芩素具有抑制HepG-2细胞侵袭迁移的作用,且具有剂量依赖性。爪哇黄芩素可影响肿瘤侵袭迁移相关基因,从而抑制肿瘤细胞的侵袭迁移,其作用机制可能是通过抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK中p-AKT和p-ERK1/2的表达,从而抑制下游分子MMP-2、MMP-9促进E-cadherin的表达,最终抑制了HepG-2细胞侵袭迁移能力。
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