藜麦糠黄酮类化合物的分离纯化及体外活性研究

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藜麦糠作为藜麦加工过程中的副产品,常常被视为残渣丢弃,并未对其充分利用。本研究以藜麦糠为原料,对藜麦糠黄酮类化合物的提取工艺、纯化方式、纯化条件、抑菌性能、抗氧化活性进行系统地研究。研究主要内容如下:以藜麦糠为原料,黄酮类化合物得率为考察对象,设置液料比、乙醇浓度、超声时间、超声温度为主要参考工艺因素。基于单因素实验的结果,按照Box-Benhnken中心组合设计结合响应面分析法,得到藜麦糠黄酮类化合物最优提取工艺。结果表明,最优提取工艺为:乙醇浓度:56%,液料比:20:1 mL/g,超声时间:14 min,超声温度:58℃,此条件下,藜麦糠黄酮类化合物的得率:(0.802±0.012)%。通过大孔吸附树脂层析法,考察七种大孔吸附树脂:D101、HPD450、HPD750、HPD950、NKA9、X-5、AB-8对藜麦糠黄酮类化合物静态吸附和解吸效果的优劣。实验表明最佳的大孔树脂为HPD950型。以样液浓度、上样体积、上样液pH、乙醇浓度、解吸液量为主要纯化工艺因素进行优化。得到藜麦糠黄酮类化合物最佳工艺条件:样液浓度0.5 mg/mL,上样体积35 mL,上样液pH 6.0,乙醇浓度75%,解吸液体积180 mL。此条件下分离纯化后藜麦糠中黄酮类化合物纯度从由(13.0±0.30)%上升到(68.0±0.50)%,回收率为(77.4±0.27)%。利用高效液相色谱对经大孔树脂纯化后的藜麦糠黄酮类化合物进行分析,检测到9种化合物,通过与黄酮类标准品对比,纯化后的藜麦糠类黄酮化合物中槲皮素、槲皮苷、芦丁、异槲皮素四种化合物得到确认。利用平板计数法考察藜麦糠黄酮类化合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌性能;抑菌圈法考察样品对根霉的抑菌性能。探究藜麦糠黄酮类化合物的样液浓度、样液pH和热处理对抑菌效果的影响。结果显示:藜麦糠黄酮对细菌的抑制效果较好,但对霉菌无明显抑制。弱酸条件下,藜麦糠黄酮的抑菌能力更强,且藜麦糠黄酮化合物70℃下仍具有一定的抑菌性,热稳定性较好。纯化的藜麦糠黄酮类化合物对羟基自由基、超氧阴离子、DPPH三种自由基的有较好的清除能力,黄酮类化合物的浓度为125μg/mL,对DPPH自由基清除率为(46.7±0.60)%,超氧阴离子的清除率为(39.2±0.70)%,羟基自由基清除率(35.39±0.86)%。
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