抑郁症是一种以心境低落为主要特征的精神障碍性疾病,现逐渐成为严重危害人们健康的重大公共卫生问题。目前,临床上用于治疗该疾病的药物多以西药为主,但西药治疗存在停药后易复发及毒副作用大等问题,极大地影响了临床疗效。中医药具有疗效稳定、作用持久、不良反应小的特点,在抑郁症的防治方面具有悠久的历史,现愈来愈成为国内外研究的热点。钩藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.)Miq.exHvail.)为药典钩藤中的主要品种,为传统中药,具有镇静、抗惊厥、抗焦虑、神经保护及抗阿尔茨海默病等作用。近年来有研究显示大叶钩藤(Uncaria macrophylla Wall.)生物碱、台湾钩藤(Uncaria lanosa Wallich var.appendiculata Ridsd)乙醇提取物(主要成分为钩藤碱)及异钩藤碱具有明显的抗抑郁作用,但钩藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.)Miq.exHvail.)在抗抑郁方面的研究鲜有报道。吲哚生物碱是钩藤的主要有效成分,根据其C-2是否被氧化可分为氧化型吲哚生物碱和非氧化型吲哚生物碱。实验室前期研究显示:来自不同产地的钩藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.)Miq.exHvail.)药材可分为主要含氧化吲哚生物碱的钩藤(S1)和主要含非氧化吲哚生物碱的钩藤(S2)两大类别。因此本课题在前期实验及钩藤广泛的神经药理活性基础上,探索钩藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.)Miq.exHvail.)总生物碱的抗抑郁活性,以期为钩藤干预、缓解抑郁症状提供实验依据,同时也进一步观察和比较主成分不同的S1和S2这两类钩藤的药理作用是否具有明显的差异。中医药的有效性的阐明除了要发现它的有效性和作用机制外,还应该了解是什么物质起作用。相较于钩藤生物碱的广泛的药理活性研究,其体内作用成分及代谢过程尚不明确,仍需要完善。中药血清药物化学是以传统药物化学研究方法为基础,凭借多种现代化分析技术,分析鉴定口服给药后血清中移行成分(包括原型成分和代谢产物),并研究其与药效的相关性,从而明确中药药效物质基础的一门学科。因此本课题在实验室前期对钩藤药材体外成分全面、准确把握的基础上,依据中药血清药物化学的研究理论及方法对S1、S2钩藤生物碱提取物大鼠灌胃后的血中移行成分进行初步的研究、探讨。主要实验内容如下:目的:研究钩藤(uncariarhynchophylla.(miq.)miq.exhvail.)总生物碱的抗抑郁作用及可能的作用机制;对s1、s2钩藤生物碱提取物的入血成分进行鉴定与表征,探讨其药效物质基础。方法:1、将小鼠束缚在特制的离心管内,每天8h、连续10d,制作小鼠抑郁模型,并灌胃给予不同剂量的s1、s2钩藤总生物碱(80?40?20mg/kg)和氟西汀(fluoxetine,flu10mg/kg)治疗。以自主活动实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验评价各组小鼠抑郁行为,用elisa法测定小鼠血清皮质酮(cort)、肿瘤坏死因子(tnf-α)和no的含量;建立测定小鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素(ne)、肾上腺素(e)、酪氨酸(tyr)、多巴胺(da)、5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)、5-羟色胺(5-ht)和色氨酸(trp)的高效液相色谱-荧光分析方法并测定小鼠脑内单胺类神经递质的含量。2、应用uflc-ms-it-tof技术分析比较s1、s2钩藤生物碱提取物、含药血清和空白血清的成分的差异,确定s1、s2钩藤生物碱提取物大鼠灌胃后血中移行成分。结果:1、与空白对照组相比,连续10d慢性束缚应激后模型组小鼠自主活动能力明显减弱,体质量明显降低,小鼠强迫游泳不动时间明显延长,糖水偏爱率明显降低(p(27)0.01),显示出抑郁症状,且小鼠血清中cort?tnf-α和no水平明显升高(p(27)0.01),脑内单胺类神经递质ne、e、tyr、da、5-hiaa、5-ht和trp含量显著降低(p(27)0.01);与模型组相比,s1、s2钩藤总生物碱均能显著增加小鼠体质量,缩短抑郁模型小鼠强迫游泳不动时间及提高小鼠糖水偏好值(p(27)0.05),改善小鼠抑郁行为,而且,s1、s2钩藤总生物碱均能显著降低抑郁小鼠血清cort?tnf-α和no水平,s1钩藤总生物碱各剂量组能显著增加5-hiaa、5-ht和trp的含量(p(27)0.05),但对ne、e、tyr和da的含量无显著影响(p﹥0.05),而s2钩藤总生物碱各剂量组能显著增加小鼠脑内ne、e、tyr、da和5-hiaa、5-ht、trp的含量(p(27)0.05)。2、通过对比样品的色谱图、分子离子、产物离子和色谱保留时间并参考相关文献,在s1钩藤生物碱提取物中发现了26个血中移行成分包含7个原型成分(去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、钩藤碱、异钩藤碱、18,19-dehydrocorynoxinicacid、18,19-dehydrocorynoxinic acid B、和Isorhynchophyllic acid)和19个代谢物;在S2钩藤生物碱提取物中发现了23个血中移行成分包含7个原型成分(缝仔嗪甲醚、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、钩藤碱和异钩藤碱)和16个代谢物其中有5个代谢物结构未确定。结论:1、钩藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.)Miq.exHvail.)总生物碱具有明显的抗抑郁作用,其机制可能与调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能,减少血清中TNF-α和NO含量以及增加脑内单胺类神经递质含量有关。但这两种类型钩藤生物碱对作用于小鼠脑组织神经递质的靶点有一定的偏向性,以氧化吲哚生物碱为主的S1钩藤总生物碱主要是通过增加小鼠脑组织5-HIAA、5-HT和Trp的含量发挥抗抑郁作用,对NE、E、Tyr和DA的改变影响不显著,而以非氧化吲哚生物碱为主的S2钩藤总生物碱主要是通过提高小鼠脑内NE、E、Tyr、DA和5-HIAA、5-HT、Trp的含量发挥抗抑郁作用。2、S1、S2两类钩藤生物碱提取物的血清药物化学研究表明其氧化吲哚类生物碱主要以水解,氧化,葡萄糖醛酸化,羟基化,甲基化和水加合等为代谢途径而非氧化吲哚类生物碱则主要以脱甲基,脱氢和水加合为代谢途径,并且其血中移行成分很可能是其体内发挥药效的直接作用物质,为明确钩藤生物碱提取物的药效物质基础提供科学依据,同时也为临床上合理使用这两种类型钩藤提供参考。