研究目的和内容:神经母细胞瘤起源于交感神经,是婴幼儿时期最常见的肿瘤、儿童时期最常见的颅外肿瘤。治疗方式以手术为主,辅以放、化疗,已有研究报道中药联合放化疗可提高小儿神经母细胞瘤的疗效。冬凌草甲素提取自中草药,具有抗微生物、抗炎、抗肿瘤作用。本研究旨在探究冬凌草甲素对神经母细胞瘤是否具有抗肿瘤效应,并进一步阐明其效应的具体分子机制。研究方法:1.通过CCK-8细胞增殖实验、Annexin-V和PI双染色法、PI染色法、TUNEL法、裸鼠移植瘤模型、裸鼠转移瘤模型等,探究冬凌草甲素对神经母细胞瘤的抗肿瘤效应。2.通过免疫印迹、免疫沉淀、免疫组化、HE染色、实时荧光定量PCR、蛋白敲低、蛋白过表达技术等,进一步探索冬凌草甲素发挥抗神经母细胞瘤效应的具体分子机制。研究成果:1.冬凌草甲素通过诱导细胞凋亡及周期阻滞在体内外抑制神经母细胞瘤细胞增殖。2.冬凌草甲素通过重活化P53蛋白引起细胞凋亡及周期阻滞。3.冬凌草甲素诱导的MDM2 P60蛋白通过对P53蛋白的去泛素作用,维持P53蛋白的持续活化。4.冬凌草甲素通过ROS在转录后水平上调USP2a蛋白。它通过MDM2 P60蛋白影响P53蛋白并与细胞凋亡密切相关。研究结论:冬凌草甲素通过诱导细胞凋亡及周期阻滞发挥抗神经母细胞瘤效应。分子机制方面,P53、MDM2 P60、USP2a蛋白是重要的效应蛋白。