【摘 要】
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钙蛋白酶是生物体内普遍存在的钙离子依赖性半胱氨酸蛋白酶,通过限制性酶解细胞内多种酶及细胞骨架蛋白系统,调节其它蛋白质的生物学活性,从而在细胞刺激应答、增殖、分化、
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钙蛋白酶是生物体内普遍存在的钙离子依赖性半胱氨酸蛋白酶,通过限制性酶解细胞内多种酶及细胞骨架蛋白系统,调节其它蛋白质的生物学活性,从而在细胞刺激应答、增殖、分化、死亡等过程中起重要作用.近年随着各生物物种基因组测序工作的大规模展开和质量分析装置的不断成熟,质量分析方法已广泛应用于蛋白质结构及功能的研究中.该研究应用免疫印迹方法及质量分析方法对提纯的猪μ型钙蛋白酶做了鉴定,并对μ型钙蛋白酶与抑制剂E64c的相互作用进行了分析,结果证明了E64c正是与钙蛋白酶活性中心处半胱氨酸残基结合而发挥抑制作用的.该研究还应用质量分析方法对线虫C.elegans钙蛋白酶系统做了检测,发现了线虫钙蛋白酶的作用底物-卵黄原蛋白,并利用抗E64c抗体于线虫可溶性蛋白提取液中检索到一种钙离子依赖性与E64c特异性结合的分子量为56KDa的钙蛋白酶样蛋白p56.通过该研究我们首次应用质量分析技术直接对钙蛋白酶与E64c的结合位点进行了分析,证明了钙蛋白酶活性中心处的半胱氨酸在其功能中所起的重要作用.在对线虫的研究中从底物水平和蛋白质水平证明了线虫体内钙蛋白酶的存在,对钙蛋白酶在进化过程中的演变有了进一步的认识.
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