乙醇酸氧化酶（EC 1.1.3.15，GO）存在于过氧化物酶体中，是光呼吸的一种关键酶，其催化活性依赖于辅酶黄素单核苷酸（FMN）。本实验室前期研究发现一种富含苯丙氨酸的碱性蛋白，命名为面具蛋白，这种蛋白与GO紧密结合，使酸性等电点的GO呈现碱性，并能使GO在SDS-PAGE中向负极迁移，同时在免疫印迹中引起免疫交叉现象的出现，而且普遍存在于生物界之中。本文通过制备两种抗菠菜GO亚基抗体，即抗菠菜GO 40 kDa亚基多克隆抗体与抗菠菜GO重组蛋白多克隆抗体，并通过免疫印迹实验验证抗体的特异性，同时，本文还讨论了免疫印迹中出现的免疫交叉反应是否受面具蛋白的影响，通过在3％BSA封闭转印膜后与2％SDS孵育以及在免疫印迹中重复使用转膜缓冲液，进一步论述面具蛋白能否在免疫印迹中与多种蛋白质相互结合而导致印迹膜中出现高背景。这些研究结果希望能在另一个角度为以后本实验室　　 初步研究结果表明以下结论：　　 （1）、本文分析了从菠菜中提取的GO，证实其等电点大于pH8.3。SDS-PAGE分析结果显示GO向正极迁移，且只有一条Mw为40 kDa的蛋白条带。DEAE离子交换层析洗脱液中的GO活性分布与洗脱液蛋白浓度和SDS-PAGE中蛋白条带的亮度成正相关。通过瑞士生物信息学研究所的ExPASy Compute pI/Mw工具计算出菠菜GO理论等电点为9.16。　　 （2）、参照已发表的菠菜GO cDNA序列，设计了一对扩增GOcDNA全长的特异引物，通过RT-PCR克隆菠菜GO cDNA，并将该cDNA亚克隆到pProExTM HTb表达载体上，转化大肠杆菌后成功诱导表达出GO重组蛋白。　　 （3）、抗菠菜GO 40 kDa亚基抗体免疫印迹结果显示，该抗体特异的识别经SDS-PAGE分离的菠菜GO 40 kDa亚基，但不能识别诱导表达的菠菜GO重组蛋白；抗菠菜GO重组蛋白多克隆抗体免疫印迹结果显示，该抗体既不能识别菠菜GO 40 kDa亚基，也不能与菠菜粗蛋白产生免疫交叉反应，但可以识别大肠杆菌粗蛋白。2％SDS孵育3％BSA封闭后的印迹膜，印迹膜中的杂带没有消失，而GO 40 kDa，条带则消失。重复利用免疫印迹转移缓冲液并不会导致印迹膜的背景信号增高。