目的:探讨SRF在低氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用方法:1.大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的原代培养:采用酶消化法从健康SD大鼠体内分离出PASMCs进行体外培养,采用免疫细胞化学鉴定PASMCs,取3-4代细胞用于后续的实验。2.低氧对细胞增殖的影响:设置常氧对照组(21%),以及低氧组,低氧组通过低氧培养箱设置四个不同氧浓度,分别为10%,5%,2%,1%,培养大鼠PASMCs。设定24h、48h和72h不同时间段。描绘各组细胞生长曲线,并用MTT法来观察细胞生长情况,检测其细胞增殖活性。3.低氧条件下SRF对细胞增殖的影响:设计出针对大鼠SRF基因的si RNA序列,实验分成四组,分别为常氧组、常氧干预组、低氧组及低氧干预组。常氧培养条件为:21%O2、74%N2和5%CO2,低氧组培养条件为:1%02、94%N2、5%CO2。干预组采用的是设计SRF干扰序列即si RNA,将SRF si RNA转染至干预组PASMCs中,分别设定24h、48h和72h三个不同的时间点。采用免疫细胞化学染色法,观察SRF在PASMCs中表达情况。并采用real-time PCR和Western-blot方法,测定各组细胞中SRF的m RNA及蛋白的表达。结果:1.体外培养的原代PASMC倒置显微镜观察形态呈圆形,悬浮在培养液中,培养第3天,贴壁生长的原代PASMC生长旺盛,形状呈梭形,胞质伸长;传代后第2天PASMC生长即可融合,呈长梭形,至第3代纯度可达98%以上;smooth muscleα-actin免疫细胞化学染色结果显示:胞核呈现淡蓝色,胞浆染成了棕黄色;2.通过描绘细胞生长曲线及MTT法发现在氧浓度为1%组,PASMC细胞增殖明显(p<0.05)。3.MTT法发现常氧组转染SRF si RNA后较常氧组,PASMC细胞增殖减弱(p<0.05),低氧组转染SRF si RNA后较低氧组,PASMC细胞增殖活性亦明显减弱;RT-PCR及Western-blot结果发现:转染SRF si RNA后不论常氧组及低氧组,SRF m RNA及蛋白水平均下降,但低氧组干预后,SRF m RNA及蛋白水平下降更明显(p<0.05)。结论:低氧可以引起大鼠肺动脉平滑肌细胞中SRF的表达上调,进而促进了大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。