神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)是烯醇化酶的一种同工酶。目前已发现5种烯醇化酶的同工酶αα、ββ、γγ、αβ、αγ、γγ、αγ组成的同工酶为神经元和神经内分泌细胞所特有,故命名为神经元特异性烯醇化酶。当缺血、缺氧、中毒或损伤时,细胞膜的完整性受到破坏,NSE便从细胞内释放出来。从而进入血液循环。目前NSE已成为小细胞肺癌及神经母细胞瘤诊断中最敏感的肿瘤标志物,它对神经系统及神经内分泌系统肿瘤的诊断、治疗及预防都有很高的临床价值。　　 我们通过基因工程技术克隆人的神经元特异性烯醇化酶,通过工程菌株的表达来获得足够量的NSE融合蛋白,对其纯化后,免疫Balb/C小鼠。采用常规杂交瘤技术进行细胞融合,通过间接ELISA法进行筛选,获得多株可稳定分泌NSE单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株。将获得的阳性杂交瘤进行腹水制备并纯化,并对抗体的亚型进行鉴定,采用ELISA、WB、IP、IF、Ihc等技术对这些单克隆抗体进行分析。免疫印迹结果显示,该抗体不仅能识别细胞内源的NSE蛋白还能识别分泌到细胞培养上清液中的NSE蛋白,此外该抗体还可用于免疫荧光及免疫组化检测。通过对这些NSE单克隆抗体进行的一系列鉴定和效价检测,我们从中挑出一株NSE单克隆抗体,用辣根过氧化物酶(HRP)对其进行标记。采用棋盘滴定实验建立了双抗夹心ELISA检测系统,并对双抗夹心ELISA检测系统的封闭条件及酶标抗体作用时间进行了优化,最后确定分别以＃3NSE单克隆抗体为包被抗体,#4NSE单克隆抗体为酶标检测抗体,初步建立了可检测NSE蛋白的双抗体夹心ELISA方法。它的有效检测范围在7.8-500ng/mL,灵敏度为6.49ng/mL,该检测系统具有良好的灵敏度。该试剂盒4℃可放置3个月,具有良好的稳定性,为基础研究和临床应用打下了基础。