肝细胞癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，已上升为第二位肿瘤死亡的原因，恶性程度高，发展迅速，转移较快，无瘤生存期短。虽然经过半个世纪的努力，在肝癌外科治疗上取得很多的成绩，但是传统外科手术加化疗或放疗等方法都有其局限性，根治性切除术后复发率仍居高不下。因此，加强肝癌分子病理机制的研究，探讨肝癌生物治疗的新途径，可能是进一步提高肝癌治疗效果的有效途径。 端粒酶逆转录酶是1997首次在人与鼠基因组中发现的四膜虫P128同源类似物，为一单拷贝基因，定位于5P15.33，是端粒酶活性构成的核心成份之一，将其导入端粒酶阴性表达的细胞株，可有效激活端粒酶，使细胞恢复增殖，是端粒酶激活的限速因素。故对hTERT表达的研究有助于了解端粒酶的作用机制。目前hTERT在肝癌发生、发展中的作用还不明确，有学者认为其是肝癌早期诊断极为可靠的指标，尤其是AFP检测阴性肿瘤组织和较难诊断的小肝癌；但采用原位杂交方法对非肿瘤组织的检测发现hTERT在非肿瘤组织肝细胞中存在着明显阳性表达；出现研究结果差异的原因还不清楚。hTERT与肝细胞癌临床病理特征关系还不确定；有学者认为hTERT表达强度与组织去分化程度之间的负相关决定了端粒酶活性表达与肿瘤分化程度的关系，但其他研究结果并不支持这种观点；与肿瘤大小的关系还存在相反的看法；还未发现与其他临床病理特征之间的关系。这些不确定因素的存在使hTERT在肝癌诊断与治疗领域的运用价值不明确。 浙江大学博士学位论文 C－myc的转录水平反映着组织细胞的增殖状态，研究发现c－myc只有与同样具有bHLH－ZIP结构的 Max构成异二聚体，才可发挥转录活性。hTERT启动区内含有的多个 c－myc结合位点提示c－myc可能是hTERT表达调控因子，这种调控关系已在其他肿瘤的研究中得到证实，然而体外研究发现用药物处理肝癌细胞后，可导致端粒酶与hTERT表达水平明显下降，但c－myC表达没有任何变化，这提示在不同细胞种群中C－ITlyC影响hTERT方式可能存在差异。目前尚无肝细胞癌组织中hTERT与c－myc表达关系的研究报道。 细胞凋亡与增殖之间的动态平衡是机体维持细胞总数稳定、清除异常细胞与维持正常机体功能状态所必须，二者之间平衡失调可直接导致肿瘤发生、发展，端粒酶再次激活与肿瘤凋亡、增殖平衡失调密切相关，体外实验证明：抑制细胞端粒酶活性，可导致端粒长度持续缩短，细胞生长抑制，凋亡增加；端粒酶广泛表达于大多数肿瘤组织中，端粒酶的表达与反映细胞增殖状态的增殖相关抗原＊－67表达具有高度一致性，是反映肿瘤细胞增殖状态的一个很好指标。hTERT是端粒酶激活的关键因素，二者在肿瘤组织中的表达具有高度的一致性：因此，可以推测盯＊RT表达与细胞增殖、凋亡的关系；h＊＊RT与细胞增殖之间的相关性在其他一些肿瘤组织中己得到证实，在肝癌中仅见一篇相关报道，且没有对hTERT表达与hi67增殖指数间关系进行比较分析；还不清楚肝癌hTERT表达与肿瘤组织hi67增殖指数之间的关系：体外抑制h＊＊RT表达的实验说明，抑制h＊＊RT表达可导致一些细胞增殖停 滞，凋亡增加；但在肝细胞癌细胞株的研究并没有发现hTERT表达与细胞凋亡之间的直接 联系。 有基于此，本课题采用RT－PCR、TUNEL与免疫组化的方法，检测了肝细胞癌hTERT、 c－myc表达情况与细胞增殖、凋亡指数，并对其中可能存在的关系进行比较分析，以期为今 后hTERT在临床诊断与治疗的运用提供理论与实验依据。 第一部分：肝细胞癌端粒酶逆转录酶表达以及与临床病理特征的关系 目 的：研究端粒酶逆转录酶（hTERT ）在肝细胞癌以及相应癌旁组织中的表达情 况，并与肿瘤临床病理特征进行比较分析，以探讨hTERT表达在肝癌发生， 发展进程中作用以及可能的临床诊断价值。 2 浙江大学博士学位论文 材料方法：32例肝细胞癌组织以及相应癌旁组织标本取自2000年10月～2001年6月 浙江大学医学院第二附属医院。采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测 hTERT在肝细胞癌组织和相应癌旁组织的表达情况，样本按hTERT表达阳 性和阴性表达分组与年龄、HBSAg、肝硬化、肿瘤大小、包膜、肿瘤癌灶。 癌栓、肿瘤病理分级和临床分期等临床病理指标进行比较分析。 结 果：l、32例肝癌组织样本中，hTERT表达阳性的有27例，占总数84．38．％； 阴性表达有5例，占15．62％，癌旁组织中仅有三例表达阳性（9．38％）， 而且表达强度明显低于相应肿瘤组织；二者比较有统计意义（P＜0刀5）。 二、肝细胞癌组织hTERT表达与年龄、HBSAg、肝硬化、包膜、肿瘤癌灶、 癌栓、肿瘤病理分级和临床分期等临床病理指标之间无