受体相互作用激酶1（receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1,RIPK1）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,在细胞的死亡和炎症中扮演重要的角色。在哺乳动物的研究中发现,RIPK1在Toll样受体（TLR）和RIG样受体（RLR）信号通路中扮演多种功能。一方面,RIPK1通过介导上游信号,激活NF-κB信号通路,产生多种细胞因子;另一方面,RIPK1又参与了I型干扰素的诱导。同时,近期的研究发现,Caspase 8对RIPK1的切割,可以调控与RIPK1相关的凋亡、程序性坏死信号通路,同时,也有研究发现Caspase 8可以通过RIPK1抑制I型干扰素的产生。然而,相较于哺乳动物,在鱼类等低等的脊椎动物中,RIPK1的研究比较有限。因此,本文主要研究了鱼类RIPK1在先天免疫信号通路中的作用及其机制,特别是RIPK1对草鱼的关键抗病毒细胞活性因子干扰素（IFN1）的调控,从而研究其参与草鱼先天免疫的分子机制,为鱼类的抗病和育种提供理论基础。本研究通过同源克隆的方法,首次克隆了草鱼ripk1基因（Ciripk1）的开放阅读框（ORF）,其长度为2019 bp,编码672个氨基酸。系统进化树表明,RIPK1在多个物种中较为保守,但包括草鱼在内的鲤科鱼类与其他物种RIPK1相似度较低。多序列比对进一步发现,草鱼RIPK1（CiRIPK1）的N端和C端较为保守,而中间结构域保守性较差。通过q PCR实验检验Ciripk1的表达,发现poly（I:C）刺激后Ciripk1在组织和草鱼肾细胞（CIK cells）中均有显著的上调,大部分组织中诱导6 h时Ciripk1基因有较高的表达量,而在CIK细胞中,Ciripk1在12 h时有较高的表达量。过表达实验发现,CiRIPK1可以在CIK细胞中上调ifn1的表达;而用RIPK1特异性抑制剂Nec-1处理CIK细胞则抑制了ifn1的表达。进一步研究发现,激酶结构域缺失的CiRIPK1过表达不会引起ifn1的上调,在poly（I:C）刺激条件下激酶结构域缺失的CiRIPK1反而会抑制ifn1的上调。为研究CiRIPK1对ifn1的调控是否与Caspase 8有关,我们检测了Cicaspase8的表达,发现在组织中caspase 8基因会响应poly（I:C）的刺激,同时,在CIK细胞中过表达Ci Caspase 8验证了其对ifn1的负调控作用。用Caspase 8抑制剂Z-Vad-FMK处理细胞会显著上调ifn1,而这种上调可以被Nec-1所抵消。通过PI-hoechst染色和CCK-8细胞活性实验,发现两种抑制剂的处理不会造成显著的凋亡或程序性坏死。通过生信网站预测CiRIPK1的切割位点,并进行点突变实验构建多种突变质粒,western blot检测发现,CiRIPK1的369位天冬氨酸可能是关键的Caspase 8切割位点。亚细胞定位发现,CiRIPK1蛋白存在于细胞质中。通过Co-IP实验发现CiRIPK1可以与TBK1相互作用,暗示草鱼RIPK1可能与哺乳类相似,通过TBK1来调节I型干扰素的表达。值得一提的是,CiRIPK1的过表达还可以上调tnf-α的表达,Z-Vad-FMK可以上调tnf-α的表达,且Nec-1可以抑制这种上调。