杨梅为浙江省第二大宗水果,产量丰富,是人们日常饮食水果之一。本实验室的前期研究已表明杨梅富含花色苷、黄酮和酚酸等酚类物质。近年来众多的研究发现酚类化合物具有抗氧化功能,而目前的抗氧化研究方法基本为有机溶剂提取物与体外化学抗氧化方法结合的模式,但这个模式与实际生理情况不符合,因此本实验希望建立一套新的抗氧化评价体系来测定杨梅的抗氧化能力。此外抗氧化化合物往往有抑制癌症的功能,癌症因为缺少特征鉴别因子,发现时往往都是晚期。顺铂作为治疗癌症的药物,对正常细胞有较强的毒性,而且一些癌细胞已经对该类药物产生抗药性,近来许多研究开始关注于日常饮食的酚类物质从而预防肿瘤形成抑制肿瘤生长。因此本实验将寻找能有效抑制肿瘤细胞增殖的杨梅酚类化合物,并且探究其机理。主要的研究内容如下：1、比较了四个杨梅品种经有机溶剂提取和体外消化方法后所得酚类物质构成的差异,发现经有机溶剂提取方法所得的总酚和总花色苷物质较多,而经体外消化方法所得到自由酚酸含量较多。2、采用细胞抗氧化方法(CAA)测定杨梅果实的抗氧化能力并与四种化学抗氧化方法(ABTS、DPPH、FRAP和ORAC)进行比较。ABTS、DPPH和FRAP的结果显示杨梅体外消化物的抗氧化能力小于杨梅有机溶剂提取物。但是却有更高的细胞抗氧化能力。在杨梅有机溶剂提取和体外消化物中,总酚含量与总花色苷含量与化学抗氧化能力密切相关(R2>0.85)。在有机溶剂提取物中,总酚含量与CAA值较低(R2=0.58)；但是在体外消化物中相关性却很高(R2=0.96)。在体外消化物中,细胞抗氧化能力与化学抗氧化能力相关性也较高。3、研究了杨梅酚类化合物：没食子酸、原儿茶酸、绿原酸、对羟基苯甲酸、对香豆酸、咖啡酸、香草酸、阿魏酸、矢车菊-3-o-葡萄糖苷和杨梅素对人铂耐受型卵巢癌细胞A2780/CP70和OVCAR-3的增殖抑制效果。结果显示原儿茶酸、绿原酸、对羟基苯甲酸、对香豆酸、香草酸、阿魏酸和矢车菊-3-o-葡萄糖苷不能抑制卵巢癌细胞的生长。而另外三种酚类化合物对癌细胞的抑制效果由强到弱分别为：杨梅素、没食子酸和咖啡酸。因此选取杨梅素作为进一步实验对象,另外高良姜素与杨梅素结构很相似,也将其作为研究对象与杨梅素进行对照。4、研究发现杨梅素和高良姜素对人铂耐受型卵巢癌细胞A2780/CP70和OVCAR-3增殖的抑制效果比顺铂更好,并且对人正常卵巢细胞IOSE 364的毒性较小。杨梅素和高良姜素都选择性地诱导这两种卵巢癌细胞凋亡,而对正常细胞诱导效果不明显。杨梅素激发了OVCAR-3细胞里Bcl-2蛋白家族相关的内凋亡通路和DR5相关的外凋亡通路。p53作为一个多功能的肿瘤抑制蛋白,通过Bcl-2蛋白家族调控OVCAR-3细胞的凋亡。此外杨梅素和高良姜素都不能引起这两种卵巢癌细胞的细胞周期停滞。由于它们能选择性抑制铂耐受型卵巢癌细胞,因此有潜力成为预防和治疗卵巢癌的活性物质。5、在体外(HUVEC)和体内(鸡胚尿囊膜)模型中,杨梅素和高良姜素能够有效抑制血管生成。同时本实验也研究了这两种化合物抑制血管生成的分子机制。杨梅素和高良姜素抑制了卵巢癌细胞A2780/CP70和OVCAR-3分泌血管生成关键调控因子—血管内皮生长因子(VEGF),并且减少了p-Akt, p-p70S6K和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)的蛋白水平。瞬时转染实验显示杨梅素和高良姜素通过Akt/p70S6K/HIF-1α抑制VEGF分泌。并且本实验也发现杨梅素通过促进p21表达,从而抑制HIF-1α和VEGF蛋白水平。这些结果表明杨梅素和高良姜素有潜力成为抗血管生成活性物质来预防和治疗卵巢癌。