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本研究将胃癌SGC-7901细胞作为研究对象,利用巢式PCR扩增技术构建pCDNA3.1-Tum-5真核质粒载体,采用离子脂质体将携带目的基因的质粒载体转染人胃癌SGC-7901细胞,同时检测Tum-5 (Tumstatin功能区)基因在胃癌细胞中的表达。观察胃癌SGC-7901细胞转染Tum-5基因前后细胞凋亡、周期和增殖的变化,本实验研究旨在探讨新型抗肿瘤血管生成抑制基因Tum-5对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。目的:构建pcDNA3.1-Tum-5载体,利用离子脂质体将携带Tum-5基因的质粒载体转染入人胃癌SGC-7901细胞,并检测转染前后细胞增殖、细胞周期和凋亡变化,进而探讨抗肿瘤血管生成抑制基因Tum-5对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:1运用巢式PCR扩增Tum-5基因并构建pcDNA3.1-Tum-5真核质粒载体;2利用Lipofectamine 2000转染系统将pcDNA3.1-Tum-5质粒载体转染入体外培养人胃癌SGC-7901细胞(转染实验组),同时设置空质粒载体对照组和未转染组,运用荧光显微镜检测转染率,通过RT-PCR检测Tum-5基因mRNA在上述三组细胞中的表达;3通过MTT法检测细胞转染后24h、48h和72h细胞增殖率;4运用流式细胞术比较三组细胞转染48h后细胞凋亡率和细胞周期。结果:1成功构建pcDNA3.1-Tum-5真核质粒载体;2瞬时转染Tum-5载体构建成功,转染率为90~95%,但未能成功构建稳定转染Tum-5细胞系,SGC-7901-Tum-5组细胞Tum-5基因mRNA表达水平明显高于空质粒对照组细胞和未转染组细胞;3转染后24h、48h和72h,转染实验组细胞增殖抑制率均明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),其中各组细胞转染72h后增殖抑制率均高于48h、24h(P<0.05);4比较转染后48h细胞周期发现,各组细胞G1期、G2期、S期的百分比无明显变化,G2 /G1的比值亦无改变;与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞Tum-5基因转染48h后细胞凋亡率在撤血清6h、12h后细胞凋亡细胞率均明显增加。结论成功构建PCDNA3.1-Tum-5真核质粒载体,并将携带有目的基因真核质粒载体,经转染后能在人胃癌细胞SGC-7901中瞬时表达,Tum-5基因具有抑制胃癌细胞增值、促进细胞凋亡的功能,但其可能对细胞周期无影响。