目的:　　了解2002-2016年间温州医科大学附属第一医院临床分离的大肠埃希菌中携带mcr-1黏菌素耐药基因的情况，并进一步探讨mcr-1阳性大肠埃希菌的耐药及流行特性，为临床预防与控制黏菌素耐药菌的产生与播散提供理论依据。　　方法:　　1. PCR方法筛选2002-2016年间温州医科大学附属第一医院临床分离大肠埃希菌中携带mcr-1黏菌素耐药基因的菌株。　　2.微量肉汤稀释法检测 mcr-1阳性大肠埃希菌对黏菌素的最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration,MIC），琼脂稀释法检测mcr-1阳性大肠埃希菌对包括头孢菌素类、β-内酰胺类、碳青霉烯类、氟喹诺酮类和氨基糖苷类等临床常用抗菌药物的MIC值。　　3.PCR扩增并测序分析 mcr-1阳性大肠埃希菌携带的超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、碳青霉烯酶以及喹诺酮类耐药基因。　　4.以Escherichia. coli EC600为受体菌，通过接合转移试验分析mcr-1耐药基因所在质粒的水平转移特性，采用以PCR为基础的质粒复制子分型（PBRT）方法对质粒复制子进行分型检测。　　5.通过S1-PFGE对 mcr-1阳性大肠埃希菌携带的质粒进行分析，并通过Southern杂交对mcr-1阳性大肠埃希菌进行mcr-1耐药基因定位分析。　　6.脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对mcr-1阳性大肠埃希菌进行同源性分析，并用多位点序列分型（MLST）分析对mcr-1阳性大肠埃希菌进行分型研究，同时与美国疾病控制和预防中心（CDC）网站（http://www.cdc.gov/pulsenet/protocols.htm）进行比对分析。　　结果:　　1.2002年-2016年间温州医科大学附属第一医院临床分离的3434株大肠埃希菌通过PCR筛选mcr-1黏菌素耐药基因，共计筛选出12株mcr-1阳性大肠埃希菌（0.35%，12/3434），其中2002年-2009年间、2011年以及2013年-2014年间分离的菌株中未检测到mcr-1阳性大肠埃希菌；2010年、2012年、2015年和2016年分离的菌株中检测到mcr-1阳性大肠埃希菌分别为：1株（0.6%，1/166）、1株（0.43%，1/234）、7株（1.10%，7/636）和3株（0.47%，3/634）。　　2.12株mcr-1阳性大肠埃希菌对黏菌素均表现为耐药，MIC值为4μg/mL-16μg/mL，且均对第三代头孢菌素和喹诺酮类抗菌药物耐药，而对碳青霉烯类和氨基糖苷类抗菌药物有较好的敏感性。　　3.PCR扩增测序显示12株mcr-1阳性大肠埃希菌还同时携带多种其他耐药基因，主要为ESBL耐药基因blaCTX-M-1、blaCTX-M-9、blaOXA-48和blaTEM，以及喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib-cr、qnrA、gyrA、qnrD等。　　4.12株mcr-1阳性大肠埃希菌通过接合转移试验，成功获得10株mcr-1阳性接合子，DC3411和DC3806未获得接合子。质粒复制子分型发现mcr-1阳性大肠埃希菌含有多个不同的质粒复制子分型，主要为IncFI和IncI1型。　　5.S1-PFGE显示12株mcr-1阳性大肠埃希菌中，除DC3411和DC3806未检测到质粒外，其余10株菌均携带两个以上大小在33.3~216.9kb之间的质粒。Southern blot定位分析发现mcr-1耐药基因定位于大小约30kb和60kb大小的质粒上。　　6.脉冲场凝胶电泳结果发现12株mcr-1阳性大肠埃希菌之间同源性较低，多序列位点分型显示除DC90和DC3411同属ST2型外，其他均为不同ST型。　　结论:　　1.本研究中2002-2016年间温州医科大学附属第一医院临床分离的大肠埃希菌中携带mcr-1耐药基因大肠埃希菌的检出率为0.35%，处于较低水平，mcr-1阳性大肠埃希菌在近几年的检出率较高，但期间阳性率并未发现明显趋势性变化。　　2.本研究中mcr-1阳性大肠埃希菌对黏菌素均表现为耐药，且对其他多种临床常用抗菌药物耐药，表现为多重耐药，其主要原因是菌株同时还携带多种耐药基因。　　3.本研究中有10株mcr-1阳性大肠埃希菌的mcr-1基因位于大小约30kb或60kb左右的可接合性质粒上，增加了黏菌素耐药性的传播。另外2株菌的mcr-1基因推测可能位于染色体上。　　4.本研究中质粒复制子分型具有多样性，包括IncFI、IncI1、IncW和IncP型等5种，其中以IncFI和IncI1型为主要类型。质粒的多样性进一步促进了耐药基因的水平传播。　　5.本研究中PFGE结果显示12株mcr-1阳性大肠埃希菌同源性较低，不存在克隆传播的现象。MLST结果显示12株菌ST型分布较散。