脑肠肽ghrelin对心肺复苏后脑损伤的作用及其机制研究

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目的:心肺复苏后脑损伤是导致心跳骤停患者复苏后死亡和致残的重要原因。近年来,脑肠肽ghrelin在多种疾病中的神经保护作用被广泛证实。本研究旨在观察ghrelin对大鼠心肺复苏后脑损伤的作用并初步探讨其可能机制。方法:第一部分:健康成年SD大鼠分三组:①sham组:仅行假手术对照;②vehicle组:经皮电刺激心外膜法诱导心跳骤停并持续6 min,心肺复苏成功后给予0.9%生理盐水静脉注射;③ghrelin组:经皮电刺激心外膜法诱导心跳骤停并持续6 min,心肺复苏成功后给予ghrelin (80μg/kg)静脉注射。假手术或白主循环恢复(ROSC)后24、48、72 h进行胶带移除实验,评价并比较三组大鼠神经功能损伤状况。ROSC72 h后,处死大鼠取全脑,切片并进行HE染色,观察大鼠脑组织及细胞形态损伤情况并计数海马CAl区正常细胞个数。TUNEL法染色观察大鼠脑神经元凋亡情况,并计数海马CA1区阳性细胞个数。第二部分:健康成年SD大鼠分三组:①sham组;②vehicle组;③ghrelin组。假手术或ROSC后6h处死大鼠。(1)分别取脑组织进行western blot和免疫组化实验,检测并比较三组大鼠海马凋亡相关因子caspase-3、bax和bcl-2蛋白表达变化。(2)取脑组织进行ELISA实验,检测并比较三组大鼠海马组织炎症因子TNF-α和IL-1β水平。(3)分别取脑组织,生化法比较海马组织MDA含量和SOD活性,然后进行western blot和免疫组化实验,检测并比较三组大鼠线粒体解耦连蛋白-2(UCP-2)表达变化。(4)分别取脑皮质组织提取纯化线粒体,行功能学实验评价并比较三组大鼠脑线粒体ATP合成效率、活性氧(ROS)产率;生化法比较脑皮质MDA含量、SOD活性及ATP含量;western blot法检测皮质线粒体UCP-2表达水平;JC-1法观察线粒体膜电位变化;透射电镜法观察并比较三组大鼠神经元线粒体形态变化。结果:(1)ghrelin提高大鼠复苏后48 h、72 h神经功能评分,减轻神经元形态损伤,减少海马区细胞凋亡。(2) ghrelin降低复苏后6h海马组织caspase-3蛋白表达,提高bcl-2/bax蛋白表达比值。(3) ghrelin降低复苏后6h海马组织TNF-α和IL-1β水平。(4) ghrelin降低复苏后6 h海马组织MDA含量,提高其SOD活性。(5) ghrelin上调海马组织UCP-2蛋白表达水平。(6) ghrelin提高复苏后6h脑线粒体ATP合成效率,降低其ROS产率。(7) ghrelin降低复苏后6h脑皮质组织MDA含量,提高SOD活性及ATP含量。(8) ghrelin上调脑皮质组织UCP-2蛋白表达水平。(9) ghrelin保护皮质线粒体膜电位。(10) ghrelin改善复苏后脑线粒体形态损伤。结论:ghrelin对心肺复苏后脑损伤具有保护作用,其机制可能与减轻复苏后凋亡、炎症及氧化应激反应有关。ghrelin能够改善复苏后脑线粒体功能和结构损伤,提高脑组织ATP含量并上调UCP-2表达水平,保护线粒体膜电位。
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