黄瓜(Cucumis sativus L.)以水苏糖作为体内同化物的主要运输形式,但在果实中只含有蔗糖、葡萄糖和果糖等可溶性糖。α-半乳糖苷酶(alpha-galactosidase, EC 3.2.1.22)是催化黄瓜体内水苏糖生物分解的关键酶。研究α-半乳糖苷酶在果柄细胞空间表达可为阐明黄瓜体内水苏糖的卸出机理提供重要线索。为此,本试验采用地高辛标记的RNA探针,通过原位杂交方法研究了两种碱性α-半乳糖苷酶mRNA在果柄处的分布。石蜡切片观察结果表明黄瓜果柄内存在双韧维管束结构,10μm厚度的切片适合用于原位杂交研究。根据两种黄瓜碱性α-半乳糖苷酶cDNA序列,在非同源区段设计各自的特异引物,运用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增相应片段,连接入含RNA聚合酶启动子的质粒pGEM-TE中,构建探针合成载体。进一步采用体外转录法合成地高辛标记的RNA探针,并利用点杂交检测其标记效率及杂交效率,结果表明在探针浓度稀释至0.03pg/μL时仍能产生明显的信号,且在总RNA浓度为1.0μg /mL时仍能产生杂交信号,可用于原位杂交研究。以黄瓜果柄的石蜡切片为材料,用上述探针对两种碱性α-半乳糖苷酶mRNA进行了原位杂交。结果表明两种酶的mRNA在皮层细胞和韧皮部中都有表达,其中韧皮部中碱性α-半乳糖苷酶Ⅱ的表达量大于碱性α-半乳糖苷酶I,其他部位未发现有杂交信号。上述结果表明韧皮部可能是黄瓜同化物卸载的重要部位。