白细胞介素2(Interleukin2，IL-2)是在分裂素或特异性抗原刺激下，主要由激活的T淋巴细胞或T淋巴细胞系产生的一类具有广泛生物学活性的细胞因子。在养禽业中，一些病原如传染性法氏囊病毒等感染后，可引起免疫抑制，这种免疫抑制大多伴随着IL-2的分泌异常或者对IL-2的反应异常。因此在不同生理状态下测定IL-2水平，对于了解机体的免疫状态很有意义，甚至可以作为一个诊断指标。本实验应用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统表达鸡IL-2(chIL-2)蛋白，意欲在此基础上建立重组chIL-2蛋白的ELISA检测技术。　　 1.通过PCR克隆chIL-2蛋白基因(chIL-2)，并克隆到杆状病毒转座载体质粒pFastBacHTB，再将重组质粒转化DH10Bac/AcNPV感受态细胞，经三重抗性和蓝白斑筛选后，获得chIL-2的杆状病毒表达质粒rBacmid-AcNPV-chIL-2。重组质粒转染Sf9昆虫细胞后，包装成重组杆状病毒AcNPV-chIL-2，重组杆状病毒在Sf9细胞上出现明显细胞病变。IFA检测结果显示，当感染细胞用鼠抗chIL-2蛋白单克隆抗体检测时，能出现特异性的绿色荧光。SDS-PAGE和Western-blot分析显示，chIL-2蛋白以胞内方式进行表达，并能与鼠抗chIL-2蛋白单克隆抗体发生特异性反应，表达蛋白的相对分子量为20kD。　　 2.用镍柱纯化的Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的chIL-2蛋白为标准待检抗原，鼠抗chIL-2单克隆抗体8H8和兔抗chIL-2的多克隆抗体分别为包被抗体和检测抗体，进行chIL-2抗原捕获ELISA反应条件的筛选。优化的反应体系为：单克隆抗体8H8包被浓度为600ng/ml，检测抗体兔抗chIL-2IgG浓度为1.25μg/ml，封闭液为5％脱脂奶/PBS，抗原作用时间为37℃90min，酶标抗体反应条件为37℃60min，底物溶液显色条件为37℃显色40min。该体系的检测限为1.56ng/ml。　　 3.应用建立的chIL-2抗原捕获ELISA方法对ConA刺激SMC分泌和H9N2流感病毒鸡感染条件下的chIL-2进行分析，结果表明，没有ConA激活的脾淋巴细胞培养上清中chIL-2的分泌量仅为5.15±0.38ng/ml以内，ConA激活的脾淋巴细胞48h培养上清中能检测出chIL-2为45.56±1.28ng/ml。H9N2感染24小时状态下，血清中chIL-2为1.81±0.67ng/ml，120小时为9.55±1.72ng/ml，144小时为3.26±1.56ng/ml。