纯钛钛片表面改性对MG-63细胞分泌和表达OPG/RANKL mRNA影响的实验研究

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目的:本课题主要研究纯钛钛片表面改性后的表面微形貌对MG-63人成骨样细胞分泌和表达OPG/RANKL mRNA的影响,从细胞和分子生物学角度探讨生物材料表面微形貌与MG-63人成骨样细胞生物学行为的相关性,为研究钛种植体—骨组织界面的作用机理以及钛种植体的表面改性和临床应用提供理论依据。材料和方法:1.采用砂磨抛光,阳极氧化和喷砂—酸碱处理的方法构建三种不同的钛片表面微形貌,分别记为PT组,AO组和SB-AB组。扫描电子显微镜(SEM)观测钛片表面微形貌,AMBIOS XP-2台阶仪测量表面粗糙度。2.MG-63人成骨样细胞接种于改性后的钛表面和对照玻片表面,收集第2,4,6,8天的细胞采用RT-PCR和real timePCR法检测OPG mRNA的表达量。3.MG-63人成骨样细胞接种于改性后的钛表面和对照玻片表面,收集第2,4,6,8天的细胞采用RT-PCR和real timePCR法检测RANKL mRNA的表达量。结果:1.处理后的钛片经扫描电镜观察均具有各自典型的特征形貌,PT组表面为方向一致的机械划痕;AO组表面形成孔隙均匀分布的蜂窝状表面,微孔大小约0.5—1um;SB-AB组表面具有多孔网状的凝胶层结构,孔隙直径在5—10um之间。粗糙度测试结果为SB-AB组>PT组>AO组,其中SB-AB组的粗糙度平均值为3.4um。2.MG-63人成骨样细胞与不同表面改性的钛片共同培养,所分泌的OPGmRNA具有表面依赖性和时间依赖性。OPG对不同表面改性后的钛片表面微形貌的调控具有敏感性,SB-AB组和AO组对OPGmRNA有明显上调优势;OPGmRNA的表达和时间呈正相关。表面微形态和时间还存在交互作用,对MG-63细胞OPGmRNA的调控有协同效应。3.MG-63人成骨样细胞与不同表面改性的钛片共同培养,粗糙度较大的SB-AB组和PT组表面表达的RANKL mRNA高于AO组和对照组。其时相性在第6天出现峰值,之后呈下降趋势。结论:1.不同的表面改性方法形成不同的钛表面微形貌,PT组表面以方向一致的机械划痕为特征;AO组具有均匀的蜂窝状微;SB-AB组可获得大孔勘套小孔的多孔隙结构,同时表面生成钛凝胶层。2.OPG mRNA在钛片表面的表达呈表面依赖性和时间依赖性。一定表面粗糙度和微孔结构以及足够的作用时间对OPG mRNA的表达有上调优势,表面微形态和时间对OPG mRNA的表达有协同作用。3.RANKL mRNA的表达与材料表面粗糙度相关,较高粗糙度可上调RANKL mRNA的表达。随时间延长,RANKL mRNA逐渐下调,提高了OPG/RANKL的表达比,具有成骨趋势。
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