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何首乌作为中国传统中药,具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨等功效。近年来的研究发现,何首乌由于含多种成分使其在应用方面有许多独到之处,并引起人们的广泛关注。现代医学表明,何首乌具有增强免疫力,抗氧化,延缓大脑衰老,提高DNA修复功能,延长寿命,降低胆固醇,改善脂肪代谢等多项功能。对何首乌中活性成分进行提取分离可为阐明何首乌的药理作用机制及其作用的物质基础研究提供物质保障,也可以为新药或复方制剂的开发研究奠定基础。本研究旨在采用现代分离和分析技术,建立何首乌中活性成分的综合提取、分离纯化工艺,同时对其主要成分建立分析方法,以发挥我国传统中药何首乌的资源优势,促进何首乌的中药现代化研究及应用。基于以上目的,本论文主要做了以下几方面的研究:
1、建立了何首乌中多种成分的检测方法。首次建立了何首乌中二苯乙烯苷、大黄素和大黄酚的胶束电动毛细管色谱分析方法以及大黄酚和大黄素的非水胶束电动色谱在线推扫富集分析方法。分别在优化的电泳条件下,得到检测限、线性范围、精密度等参数。
2、利用自行组装的超声负压循环提取系统开展了何首乌中四种成分同时提取的工艺条件研究,通过单因素实验和正交实验详细考察了超声低压回流提取方法的影响因素,确定二苯乙烯苷、大黄素、大黄酚和淀粉的最佳提取工艺为:提取时间2 h,提取温度40℃,提取溶剂为80%乙醇,料液比为1:12,超声功率为1kW。在此条件下二苯乙烯苷、大黄素、大黄酚和淀粉的提取率分别为92.3%、89.6%、87.2%和84.6%。
3、建立了何首乌提取物中四种成分的分离工艺,经过滤将淀粉与醇溶物分离,利用水溶性的差异可将醇溶物中二苯乙烯苷与大黄素和大黄酚这两种蒽醌分离,最后利用大黄素和大黄酚pKa值的差异将二者分离。采用溶剂结晶法纯化了二苯乙烯苷、大黄素和大黄酚。制备得到的二苯乙烯苷、大黄素、大黄酚和淀粉的纯度分别为78.9%、81.9%、83.2%和87%。