灰木相思(Acacia implexa Benth.)是近年来我国南方引进的主要营林树种之一,它具有适应性强、速生丰产、改良土壤、用途广泛等特点。目前,灰木相思优良种苗供应不足,无法满足营林生产的需求,而利用离体快繁技术实现灰木相思工厂化育苗是解决此问题的一条较佳途径。由于引种地与原产地气候类型的差异。低温冻害往往成为树种引种成功的限制性因素。本试验选用灰木相思作为研究材料,通过组织培养技术建立灰木相思优树离体培养再生体系,期望能为快速繁育出具有稳定优良形状的种苗提供一条新途径;并运用抗寒评估技术,研究在低温胁迫下灰木相思生理生化指标的变化,利用聚类分析,筛选出抗寒性强的无性系。研究结果如下:1.灰木相思外植体的消毒。用70%乙醇浸泡30 s,6%次氯酸钠溶液8 min,0.1%升汞10 min可以使灰木相思外植体污染率降低到19.2%。2.灰木相思外植体不定芽的诱导和增殖。选用6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L+ZT 0.3mg/L培养基配方诱导灰木相思外植体不定芽,诱导的不定芽芽丛密集,健壮,生长快。灰木相思组培苗不定芽增殖培养基配方为:MS+6-BA 0.9 mg/L+ZT 0.3 mg/L+IAA 0.4 mg/L,平均增殖系数为3.14。3.灰木相思生根和移栽。灰木相思生根的最佳培养基是1/2 MS+0.4 mg/L NAA+1.0 mg/LIAA+10 g/L蔗糖+1.0 g/L活性炭,平均生根率达到82.47%。灰木相思比较理想的移栽基质为相思表层土:泥炭土=1∶1,成活率达到87%,而且小苗健壮,叶色浓绿,生长快。4.低温胁迫下,灰木相思12个无性系的相对电导率随着低温胁迫的增加,都不同程度的增大,抗寒性强的无性系IM1、IM2、IM3相对电导率增加小。根据各无性系相对电导率的改变,利用Logistic方程确定了各无性系的半致死温度。5.低温胁迫下,灰木相思12个无性系的SOD酶活性和POD酶活性在低温处理前期均呈上升趋势,可能是低温使保护机制启动,酶活性升高,清除毒害物质,保护植物体免受伤害;当低温超过其各自半致死温度时,低温已对细胞结构造成严重伤害,导致SOD、POD酶失活,活性大幅下降。6.低温胁迫下,灰木相思12个无性系的MDA含量和可溶性蛋白含量总体来说呈现增加趋势。抗寒性强的无性系IM1、IM2、IM3,可溶性蛋白含量增加越大,MDA含量增加越小。7.低温胁迫下,灰木相思12个无性系的可溶性糖含量变化和游离脯氨酸含量变化基本一致,先升高后下降。8.本试验中,为综合评价灰木相思的抗寒性,对相对电导率、SOD酶活性、POD酶活性、丙二醛含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量和游离脯氨酸含量7个指标进行聚类分析,在遗传距离为6.10时,筛选出最抗寒的无性系为IM1、IM2和IM3。