本研究从河南、陕西、山西、河北等12个不同地区发酵第3-5天的玉米青贮饲料中分离出主导发酵的优势乳酸菌35株,采用16Sr DNA技术进行鉴定和比较,对筛选的优势乳酸菌和布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)的发酵特点和抗菌特性进行了研究,并进一步验证其对玉米青贮发酵进程、发酵产物和瘤胃体外发酵的影响。同时还研究了尿素对玉米发酵过程中乳酸菌数量及发酵产物的影响。1.青贮发酵过程中优势乳酸菌的分离与筛选饲料青贮的效果取决于主导发酵的优势乳酸菌的种类和数量,研究青贮饲料中优势乳酸菌种类、数量和特性对于预测青贮质量、开发乳酸菌青贮添加剂和调控青贮发酵有极其重要的意义。本试验将12个不同地区采集到的全株玉米和青玉米秸进行实验室青贮,从中分离出35株优势乳酸菌,并通过16Sr DNA技术进行鉴定,其中19株(54.2%)为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),10株(28.6%)为短乳杆菌(Lactobacillus brevis),5株(14.3%)为乳酸杆菌(Lactobacillus sp),1株(2.9%)为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus spicheri)。说明主导玉米青贮发酵的乳酸菌主要是植物乳杆菌、短乳杆菌和乳酸杆菌。2.青贮优势乳酸菌产酸特性的比较和抑菌试验为了研究青贮优势乳酸菌产酸特性,比较从发酵第3-5天的玉米青贮饲料中分离出主导发酵的35株乳酸菌为在MRS培养基和玉米汁培养基中的产酸情况,同时选择部分主导发酵的乳酸菌利用牛津杯法初探其抑菌原理。结果表明分离的优势乳酸菌产酸能力无论是在MRS培养液还是玉米汁培养液中均有较大差异。供试的9株优势乳酸菌中3株对大肠杆菌有抑制作用,6株对金黄色葡萄球菌有抑制作用。3.添加不同来源乳酸菌对青贮玉米发酵效果的影响为了探讨野生乳酸菌作为青贮接种剂对玉米青贮发酵的影响,在全株玉米青贮时添加从青贮饲料中分离纯化的优势乳酸菌,于青贮后4天和90天分别测定青贮饲料的pH、乳酸、乙酸、乳乙酸比例及总有机酸含量。结果表明:添加分离的优势乳酸菌能改变发酵过程中pH、有机酸含量和组成,从而影响发酵效果。其中乳酸菌531能显著降低青贮后4天和90天的pH(p<0.05),乳酸菌531和Lactobacillus buchneri显著提高了青贮后4天的乳酸产量(p<0.05),乳酸菌332和Lactobacillus buchneri显著提高了青贮后90天乙酸产量(p<0.05),Lactobacillus buchneri显著提高了青贮后90天的总有机酸产量(p<0.05)。4.植物乳杆菌和布氏乳杆菌发酵特点比较及其对玉米青贮发酵的影响为了比较lactobacillusplantarum和lactobacillusbuchneri发酵特点和它们对玉米青贮发酵进程和有氧稳定性的影响,利用mrs培养基和在全株玉米青贮时添加lactobacillusbuchneri和lactobacillusplantarum,测定青贮发酵过程中ph、乳酸菌、酵母菌、总有机酸、乳酸、乙酸等的变化及青贮饲料的有氧稳定性。结果表明:lactobacillusplantarum和lactobacillusbuchneri在mrs培养基中的产酸特点有很大差异。玉米青贮中添加lactobacillusplantarum加速了发酵过程中ph的下降速度,提高乳乙酸的比例,但降低了青贮饲料的有氧稳定性。添加lactobacillusbuchneri减缓了全株玉米青贮发酵过程中ph的下降速度,降低了乳乙酸的比例,抑制真菌生长,提高了青贮饲料的有氧稳定性。添加lactobacillusplantarum和lactobacillusbuchneri的复合接种剂,增加了总有机酸生成量,提高了青贮饲料的有氧稳定性。5.添加尿素对全株玉米青贮发酵过程中微生物变化的影响为了探讨尿素对全株玉米青贮发酵进程中微生物变化的影响,采用实验室青贮法,在全株玉米青贮时添加尿素(0.2%,0.4%,0.6%,0.8%)和尿素与硫酸铵的复合物(0.35%+0.1%),测定青贮发酵过程中(1、3、7、21、56、91d)ph及乳酸菌、酵母菌、霉菌等主要微生物的数量变化,总有机酸、乳酸、乙酸等含量的变化,发酵第56d和91d青贮饲料的有氧稳定性。结果表明:添加尿素减缓了发酵过程中ph和发酵中后期乳酸菌的下降速度,抑制了真菌的生长繁殖,且随着添加量增加,其减缓和抑制作用越明显。添加尿素和硫酸铵的复合物与单独添加尿素相比,添加复合物其减缓和抑制作用要比单独添加尿素迅速。添加尿素减缓了全株玉米青贮发酵过程中ph的下降速度,随着尿素添加量的增加,提高了乳酸乙酸的比例。添加尿素和硫酸铵复合物,增加了总有机酸生成量。五个试验组的氨态氮含量都明显高于对照组,干物质回收率呈逐渐降低趋势、粗蛋白含量显著增高,有氧稳定性也呈现先升高后降低的趋势。添加尿素和硫酸铵的复合物与单独添加同剂量尿素相比,添加尿素和硫酸铵的复合物组更能显著提高玉米青贮饲料中氨态氮含量和有氧稳定性。6.青贮优势乳酸菌对奶牛瘤胃体外发酵的影响从自然发酵的玉米青贮饲料中分离鉴定的2株有代表性的优势乳酸菌lactobacillusplantarum、lactobacillusbrevis和1株异型发酵乳酸菌lactobacillusbuchneri按109cfu/l的接种量接种到瘤胃液中,同时分别设加入最终浓度为10g/l葡萄糖的对照组,研究青贮饲料中的乳酸菌是否可以在体外瘤胃液中生存和影响瘤胃发酵。结果表明,lactobacillusplantarum和lactobacillusbrevis以及lactobacillusbuchneri均可以在体外发酵瘤胃液生存。在有外源葡萄糖添加的情况下lactobacillusbrevis和lactobacillusbuchneri可以提高发酵初期乳酸的含量,而Lactobacillus buchneri还可以增加瘤胃发酵液中乙酸含量。