【摘 要】
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背景:2020年全球癌症数据显示,乳腺癌新发病例超过226万例,取代肺癌成为全球的第一大癌症。目前,手术切除仍是乳腺癌的常规治疗方式,辅以新辅助治疗或放化疗,以提高患者的生存期及预后。但作为体表肿瘤,乳腺癌复发转移是患者因癌死亡的重要原因,也是现阶段研究的热点和亟待攻克的难题。在不同分子分型中,三阴性乳腺癌因其恶性程度高、侵袭转移能力强、患者预后差、死亡率高等特点,引起广泛的关注。另一方面,参与转
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背景:2020年全球癌症数据显示,乳腺癌新发病例超过226万例,取代肺癌成为全球的第一大癌症。目前,手术切除仍是乳腺癌的常规治疗方式,辅以新辅助治疗或放化疗,以提高患者的生存期及预后。但作为体表肿瘤,乳腺癌复发转移是患者因癌死亡的重要原因,也是现阶段研究的热点和亟待攻克的难题。在不同分子分型中,三阴性乳腺癌因其恶性程度高、侵袭转移能力强、患者预后差、死亡率高等特点,引起广泛的关注。另一方面,参与转录后基因表达调控的非编码miRNA参与了肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡、EMT、血管形成等多个生物学过程。现有研究证实miR-338-5p在多种肿瘤中可抑制肿瘤进展,但在乳腺癌中的作用机制尚未明确,本研究将针对miR-338-5p在三阴性乳腺癌发生发展中的作用及潜在的分子机制进行深入探讨。方法:首先通过GEO在线数据库分析miR-338-5p在乳腺癌组织中的表达情况,再通过荧光定量PCR检测其在不同乳腺癌细胞株中的表达水平。然后在三阴性乳腺癌细胞中高表达或抑制miR-338-5p的表达后,通过CCK8、划痕实验、Transwell等检测其表达对细胞增殖、迁移、侵袭等功能的影响。利用转录组测序结合在线预测数据库筛选miR-338-5p可能调控的下游靶基因。双荧光素酶报告基因实验验证miR-338-5p对其下游靶基因的直接调控关系。挽救实验用于明确miR-338-5p对其下游靶基因调控的生物学效应。免疫共沉淀用于验证转录因子与下游靶基因启动子直接结合。结果:GEO数据显示miR-338-5p在乳腺癌组织表达水平显著低于癌旁组织,且miR-338-5p在三阴性乳腺癌细胞株表达显著低于其他类型。在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT549细胞中高表达miR-338-5p,显著抑制了细胞的增殖、迁移、侵袭能力,且间质表型标志物Vimentin、EZH2和ZEB1表达显著下降。转录组测序结合在线预测结果显示转录因子ETS1是miR-338-5p的潜在下游靶基因。荧光定量PCR和Westernblot结果显示,高表达miRNA-338-5p可显著下调ETS1的蛋白水平表达;双荧光素酶报告基因实验表明miR-338-5p可以直接作用于ETS1的3’UTR区域,抑制ETS1的翻译进而降低其表达。染色质免疫共沉淀实验发现,ETS1可以直接与Notch1的启动子区域结合,进而转录激活Notch1的表达。而在敲减ETS1的三阴性乳腺癌细胞中重新过表达Notch1,可以逆转其对三阴性乳腺癌细胞功能的影响。结论:本研究发现miRNA-338-5p可以显著抑制ETS1的表达从而抑制三阴性乳腺癌细胞的侵袭转移能力,而后者则通过与Notch1启动子区域直接结合促进Notch1的转录活性。本研究首次报道了miR-338-5p/ETS1/Notch1信号轴在三阴性乳腺癌中的作用机制,为三阴性乳腺癌治疗提供了一个新的潜在治疗策略,为其成为乳腺癌临床检测及治疗评判的指标奠定了基础。
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