【摘 要】
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拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是一种重要的海水经济蟹类,在我国东南沿海地区广泛养殖,但是对其营养需求的研究仍然不完善。目前市场上缺乏优质的青蟹人工颗粒饲料,因此拟穴青蟹的养殖仍然主要依赖生物饵料。磷脂和胆固醇作为甲壳动物的必需营养素,在生长发育等方面发挥着重要的作用。本文通过研究饲料中添加不同磷脂水平及与胆固醇的交互作用对拟穴青蟹早期幼蟹生长、体组成、脂质代谢、渗透调节以及抗氧
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拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是一种重要的海水经济蟹类,在我国东南沿海地区广泛养殖,但是对其营养需求的研究仍然不完善。目前市场上缺乏优质的青蟹人工颗粒饲料,因此拟穴青蟹的养殖仍然主要依赖生物饵料。磷脂和胆固醇作为甲壳动物的必需营养素,在生长发育等方面发挥着重要的作用。本文通过研究饲料中添加不同磷脂水平及与胆固醇的交互作用对拟穴青蟹早期幼蟹生长、体组成、脂质代谢、渗透调节以及抗氧化能力的影响,以为拟穴青蟹专用配合饲料研发提供参考。实验一:饲料中添加磷脂酰胆碱对拟穴青蟹早期幼蟹生长、体成分、渗透调节和抗氧化能力的影响。实验设计了6个处理组,包含5个磷脂酰胆碱（PC0.1、PC0.5、PC1.0、PC2.0、PC4.0）水平和1个大豆磷脂（SL2.0）水平的饲料,对初始体重为8.69mg的拟穴青蟹早期幼蟹进行为期60天饲喂实验,每组设置3个重复每个重复24只幼蟹。实验结果表明,在PC2.0和SL2.0饲料组的拟穴青蟹获得最高增重率（WG）和特定生长率（SGR）。全蟹的粗脂肪含量随着饲料磷脂酰胆碱水平的增加而显著上升。另外,全蟹的长链多不饱和脂肪酸（LC-PUFA）随饲料PC水平的上升显著提高。与饲喂PC0.1组的拟穴青蟹比较,在饲喂高水平PC饲料组的拟穴青蟹的超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性以及总抗氧化能力（T-AOC）显著上升,同时丙二醛（MDA）含量显著下降。随着饲料PC水平的升高,固醇调节元件结合蛋白（srebp-1）、脂肪酸合成酶（fas）、脂肪酸去饱和酶6（Δ6 fad）、脂肪酸去饱和酶9（Δ9fad）、脂肪酸延伸酶4（elovl4）和脂肪酸延伸酶6（elovl6）的基因表达水平逐渐降低。但脂肪酸结合蛋白（fabp）基因表达量随着饲料PC添加水平增加呈先升高后下降。此外,PC4.0组幼蟹的Na+/K+-ATP酶（NKA）活性显著高于其他组。Na+/K+-ATPase（nka）和Na+/K+/2Cl-协同转运蛋白（nkcc）的基因表达也都随着饲料PC水平的添加而升高。养殖实验结束后,通过急性盐度刺激评价了拟穴青蟹渗透压调节能力。结果发现,10小时急性盐度刺激后PC4.0组幼蟹的存活率最高,说明高水平PC能够提高拟穴青蟹早期幼蟹的渗透压调节能力。实验二:饲料不同磷脂和胆固醇水平对拟穴青蟹早期幼蟹生长、体成分、抗氧化能力以及脂质代谢的影响。采用双因素实验方法,设计一个2*3的实验,包括两个胆固醇水平（0.4%和0.8%）和3个磷脂水平（1.8%、2.5%和3.2%）,共6组实验饲料:CL-PL（胆固醇0.4%和磷脂1.8%）、CL-PM（胆固醇0.4%和磷脂2.5%）、CL-PH（胆固醇0.4%和磷脂3.2%）、CH-PM（胆固醇0.8%和磷脂1.8%）、CH-PM（胆固醇0.8%和磷脂2.5%）、CH-PH（胆固醇0.8%和磷脂3.2%）,每组设置3个重复,每个重复28只幼蟹（初始体重为0.01g）,进行为期8周生长实验。实验结果表明在0.4%胆固醇水平下,随着饲料磷脂水平的增加,拟穴青蟹的末重（FBW）、WG和SGR均显著升高。在0.8%胆固醇水平下,饲料磷脂水平对拟穴青蟹的生长没有显著影响。此外,在1.8%磷脂水平下,高胆固醇水平显著提高了拟穴青蟹的生长;但是在3.2%磷脂水平下,高胆固醇反而抑制拟穴青蟹的生长。在本研究中,不同实验饲料处理几乎不影响拟穴青蟹的体组成。此外,在不同胆固醇水平下均观察到LC-PUFA随着饲料磷脂水平的增加而升高的趋势。在0.8%胆固醇水平下,拟穴青蟹组织中MDA含量随着饲料磷脂水平的添加而显著上升,同时伴随CAT活性显著降低。在0.4%胆固醇水平下,随着饲料磷脂水平的上升,脂肪合成基因srebp-1和fas表达显著上升。在0.8%胆固醇水平下,脂质转运相关基因fabp的表达水平随着饲料磷脂水平的上升而显著下降。此外,在0.4%胆固醇水平下,LC-PUFA合成相关的基因elovl4、elovl6和Δ9 fad表达水平随着饲料磷脂水平的增加而显著上升。另一方面,在所有磷脂水平下,与0.4%胆固醇水平相比,0.8%胆固醇水平提高了elovl4、elovl6和Δ9 fad基因的表达。综上,在实验一的条件下,基于WG的二阶多项式回归分析,拟穴青蟹早期幼蟹饲料中PC的适宜添加量为2.60%;实验二发现在胆固醇不足的情况下,提高饲料磷脂水平能够显著提高拟穴青蟹早期幼蟹的生长性能。但是,当饲料胆固醇水平能够满足其生长需求时,添加3.2%的磷脂反而会抑制拟穴青蟹的生长和抗氧化能力。此外,拟穴青蟹的脂代谢过程同时受到了胆固醇和磷脂的影响,并且两者之间存在着交互作用。
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