【摘 要】
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Bt是一种可以形成芽胞的革兰氏阳性菌,它的伴孢晶体蛋白对多种属的昆虫有毒杀作用,各个伴孢晶体蛋白杀虫谱专一。CryIBa3基因对鳞翅目昆虫具有专一的杀虫功效。CryIBa3基因由
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Bt是一种可以形成芽胞的革兰氏阳性菌,它的伴孢晶体蛋白对多种属的昆虫有毒杀作用,各个伴孢晶体蛋白杀虫谱专一。CryIBa3基因对鳞翅目昆虫具有专一的杀虫功效。CryIBa3基因由1228位氨基酸残基组成,其核心区域位于22-655位氨基酸残基之间。本研究根据CryIBa3基因的原始序列,利用玉米密码子偏好性改造合成了CryIBa3基因。采用农杆菌侵染法将CryIBa3基因全长片段及其核心区域片段转化到水稻中,通过组织培养获得转化种子To代,再经遗传转化检测,获得了T1代的检测结果。主要研究结果如下:1)依据玉米密码子偏好性对CryIBa3基因序列进行密码子改造。使其GC含量达到了56.58%,合成基因蛋白质序列与原基因一致,其DNA序列差异率达19%。2)构建了全长L CryIBa3与核心区域片段SCryIBa3两个植物表达载体。通过农杆菌介导转化水稻获得13个To带PCR阳性植株,经筛选检测得到8个T1代转基因植株。3)对T1代转基因株分蘖期和抽穗期叶子中Bt毒蛋白含量的测定,结果显示:分蘖期的Bt含量在630ng/g左右,抽穗期的Bt含量在710ng/g左右,明显高于分蘖期。这说明Bt毒蛋白的含量随生育时期的不同而表现出时空差异。4)对T1代转基因株抽穗期叶子和穗子中Bt毒蛋白含量的测定,发现叶子中的Bt含量710ng/g高于穗子中的650ng/g。这说明Bt基因在植株体内的表达含量随着组织的不同而不同。5)对T1代转基因株含有CryIBa3基因全长及其片段的转基因植株Bt含量的比较,发现叶子跟穗子中都是SCryIBa3在转基因株Bt毒蛋白表达量都要高于LCryIBa3,这说明CryIBa3核心区域片段在水稻中更容易表达。
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