论文部分内容阅读
目的：原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)是一种恶性程度高、预后差的恶性肿瘤。目前临床常用的较好的指标是AFP,但仍有不少PHC患者AFP呈阴性,由于缺乏理想的血清学检测指标,大多数患者确诊时已经处于中期甚至晚期,缺乏有效的治疗手段,预后很差。晚期PHC多不能耐受手术,即使可以勉强切除,但术后复发率高,且易转移,故早期发现PHC对提高患者的生存率及生活质量特别重要。本课题以GPC3为重点研究对象,针对血清标志物AFP、GPC3、AFU、CA199单独及联合检测进行分析研究,旨在为PHC的早期诊断找出更好的血清指标。方法：1.研究对象：选取承德市中心医院肿瘤外科和消化内科2009年9月—2011年7月住院的经手术或病理诊断的原发性肝癌患者55例作为肝癌组,其中男32例,女23例,年龄(54.4±11.9)岁。选取同期在消化内科住院的肝硬化患者30例作为肝硬化组,其中男18例,女12例,年龄(52.8±9.7)岁。肝硬化符合以下诊断标准：(1)有明确慢性肝病史或体征,(2)门静脉高压症表现,(3)B-超或CT检查符合肝硬化表现。肝癌组和肝硬化组患者临床资料均完整。正常对照组为同期在我院体检中心健康体检者30例,其中男17例,女13例,年龄(50.9±11.5)岁。3组间年龄、性别、ALT、AST、HBeAg、HCV抗体阳性情况等一般资料,经检验均具有均衡性(P>0.05)。2.标本采集：所有研究对象均在清晨空腹采集外周血2mL,无溶血、脂血,2000 r/min离心8 min,分离血清,-40℃保存。3.检测：采用电化学分析仪E601(瑞士ROCHE公司)及配套化学发光免疫试剂测定血清AFP、CA199;采用速率法检测血清AFU；采用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清GPC3(上海蓝基生物科技有限公司)。严格按试剂盒说明操作。4.Cut-off值确定：应用SPSS 17.0绘制受试者工作曲线(receiver operator characteristic curve, ROC),以曲线下面积最大面积确定GPC3、 AFU截值。5.统计学分析：应用SPSS17.0统计软件进行统计分析,计量资料以x±S表示,均数比较采方差分析,计数资料及率的比较采用χ2检验。应用敏感度[a/(a+c)],特异度[(d/(b+d)],诊断优势比(a×d/b×c)及准确度[(a+d)/(a+b+c+d)],评价上述指标单独及联合诊断PHC的效能。联合检测的判断标准：组合中只要有一项超过临界值,即判断为阳性；组合中所有值均低于临界值,即判断为阴性(a为真阳性病例数；b为假阳性病例数；c为假阴性病例数；d为真阴病例性病例数)。检验水准以P<0.05为有统计学意义。结果：1.肝癌组、肝硬化组及正常对照组各血清指标检测结果：肝癌组、肝硬化组及正常对照组血清指标GPC3的检测水平分别为：3.9±2.8ng/mL、0.6±0.5ng/mL、0.5±0.4ng/mL,肝癌组血清指标GPC3水平与肝硬化组和正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),肝硬化组血清指标GPC3与正常对照组比较,差异有统计学意义(P>0.05)；肝癌组、肝硬化组及正常对照组血清指标AFP的检测水平分别为：242.3±12.5μg/L、143.2±10.6μg/L、11.2±3.4μg/L,肝癌组血清指标AFP水平与肝硬化组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),肝硬化组血清指标AFP与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；肝癌组、肝硬化组及正常对照组血清指标AFU的检测水平分别为：73.0±12.5U/L、12.1±4.8 U/L、7.1±3.2 U/L,肝癌组血清指标AFU水平与肝硬化组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),肝硬化组血清指标AFU与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；肝癌组、肝硬化组及正常对照组血清指标CA199的检测水平分别为：88.3±15.4U/ml、61.6±12.2 U/ml、 25.1±10.6 U/ml。肝癌组血清指标CA199水平与肝硬化组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),肝硬化组血清指标CA199与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2. GPC3、AFU截值：GPC3的ROC曲线最大面积：0.755,95%可信区间：0.578-0.786；AFU的ROC曲线下最大面积：0.715,95%可信区间：0.599-0.830。GPC3>2 ng/mL为阳性；AFU>35 U/L为阳性。3.各血清指标单独检测PHC结果：AFP敏感度、特异度及准确度依次为：74.5%、83.3%、77.6%；GPC3敏感度、特异度及准确度依次为：78.2%、80.0%、81.2%；AFU敏感度、特异度及准确度依次为：70.9%、76.7%、72.9%；CA199敏感度、特异度及准确度依次为：69.1%、76.7%、71.8%。4.各血清指标联合检测PHC结果：血清指标GPC3联合AFP诊断PHC的敏感度、特异度、准确度分别为92.7%、76.7%、85.9%；AFU联合AFP诊断PHC的敏感度、特异度、准确度分别为80.0%、73.3%、77.6%；CA199联合AFP诊断PHC的敏感度、特异度、准确度分别为85.4%、70.0%、80.0%; GPC3、AFP、AFU联合检测诊断PHC的敏感度、特异度、准确度分别为94.5%、63.3%、83.5%；GPC3、AFP、CA199联合检测诊断PHC的敏感度、特异度、准确度分别为96.4%、63.3%、84.7%；AFP、AFU、A199联合检测诊断PHC的敏感度、特异度、准确度分别为90.9%、60.0%、80.0%; AFP、GPC3、AFU、CA199联合检测敏感度为：100%、特异度为：40%、准确度为：78.8%。AFP与GPC3联合较其与其他两指标联合敏感度升高,差异有统计学意义(P<0.05),特异度及准确度比较无统计学意义(P>0.05)。三项指标联合检测较各指标单独及两两检测诊断敏感度均有不同程度的升高,但诊断特异度较单独检测及两两联合明显下降；四指标联合检测敏感度可达100%,但特异度只有40%。GPC3联合AFP诊断PHC较各项指标单独检测敏感度、准确度均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),特异度虽较各指标单独检测有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1.GPC3在原发性肝癌患者血清中高表达,在肝硬化患者及正常组血清中不表达或低表达,可作为原发性肝癌诊断的肿瘤标志物。2.AFP是诊断原发性肝癌最常用的较特异的肿瘤标志物,目前还未找到可替代它的更好的肿瘤标志物,AFP联合GPC3、AFU、CA199可不同程度的提高诊断的敏感度。三指标及四指标联合检测虽可显著提高诊断的敏感度,但特异度下降明显。3.GPC3在AFP阴性的原发性肝癌患者血清中有较高的检出率,与AFP联合检测可提高原发性肝癌的检出率,对AFP阴性及低浓度的原发性肝癌的筛选均有一定的临床诊断价值,有助于提高原发性肝癌的早期诊断率。