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目的建立脑积水(Subarachnoid hemorrhage) Sprague-Dawley (SD)大鼠模型,采用避暗试验方法研究脑积水模型大鼠学习记忆功能,通过检测神经生长相关蛋白(neuronal growth associated protein, GAP-43)在脑积水模型大鼠海马组织中表达,探讨GAP-43与学习记忆之间的关系。方法1.脑积水Sprague-Dawley大鼠模型建立与学习记忆相关性研究：健康雄性SD大鼠160只,随机分为脑积水模型组(n=96只),假手术组(n=32只),空白对照组(n=32只),脑积水模型组分1w,2w,4w,6w,共4个亚组,假手术组只进行手术,注入生理盐水,不注入白陶土悬液,空白对照组和模型组、假手术组饲养环境和喂食相同。观察大鼠行为学改变,采用避暗试验方法记录每只大鼠实验潜伏期(latentperiod.LT)以及来回穿梭次数(EN),研究学习记忆能力。2.大鼠海马GAP-43的表达与学习空间记忆的关系：各实验组大鼠均采用单笼饲养,饲养环境相同,避暗试验检测后,无痛处死脑积水模型组24只,假手术组8只及空白对照组大鼠8只,剩余大鼠进入下一亚组。脑积水模型组每亚组于1w,2w,4w,6w时行避暗实验后无痛处死大鼠,模型组每亚组取大鼠n=24只,假手术组及空白对照组取n=8只；检测GAP-43mRNA及蛋白表达表达。每模型实验组大鼠2/3用乙醚麻醉断头,无RNA酶试验台内快速取出海马,并液氮冷藏后迅速移至-80℃冰箱备用,另1/3经吸入乙醚后用4%多聚甲醛灌注、蔗糖梯度脱水后,应用OCT(Sakura,USA)包埋固定,-80℃冰箱保存以备组织切片用。应用免疫组化、RT-PCR和westernblot等技术方法研究脑积水模型大鼠海马GAP-43mRNA及相关蛋白的表达并探讨与学习及空间记忆的关系。结果1.脑积水模型大鼠制作成功,经过动物MRI监测系统,确认为脑积水后,大鼠有认知改变表现。脑积水模型制作成功率为95.6%。脑积水模型组1w组避暗试验结果的LT(51.73±3.62s)、EN为(3.89±±1.07次)；2w组避暗试验结果为LT(44.51±1.28s)、EN为(4.35±1.19次)；4w组避暗试验结果LT为(37.86±±3.57s)、EN为(5.71±0.49次)；6w组避暗试验结果为(31.22±±3.18s)、EN为(3.96±±1.37次),假手术组避暗试验结果LT为(53.144±3.11s)、EN为(3.55±±1.51次),空白对照组避暗试验结果LT为(55.00±3.78s)、EN为(3.65±1.52次)。脑积水模型组与对照组比学习记忆能力明显下降(P<0.05),组间对比,模型组大鼠1w、2w、4w、6w组认知功能逐渐减弱,学习记忆有明显减弱,有统计学意义(P<0.05),均较空白组差,比值均有统计学意义(P<0.05)。2.分子生物学检测显示：(1)免疫组织化学结果：GAP-43蛋白为胞质蛋白为棕黄色。阳性细胞百分率脑积水模型模型组与空白对照组、假手术组均有明显差异性(P<0.05),模型组明显低于对照组。模型组组内比较,阳性细胞百分率6w明显低于1w组、2w组、4w组,6w组最低。随时间延续,脑受压时间长,认知功能逐渐下降(P<0.05)。(2)RT-PCR反转录聚合酶链式反应试验结果：紫光灯下,naker的对照下目的条带清晰可见,通过测定各条带的光密度值校对值,脑积水模型组与对照组有明显差异,模型组明显低于对照组(P<0.05)。模型组内比较,光密度校对值模型组1w、2w、4w组明显高于6w组,6w组最低(P<0.05)。(3)Vestern blot印记检测结果：各个组大鼠海马中GAP-43蛋白均有表达,在标准蛋白分子参照物maker的对照下,通过测定各目的条带的光密度值,与管家基因蛋白比值校对,脑积水模型组与对照组有明显差异(P<0.05),模型组明显低于对照组。模型组内比较,光密度校对值模型组1w、2w、4w组时明显高6w组,6w组最低(P<0.05)。结论1.脑积水模型大鼠成功建立,脑积水模型大鼠学习记忆等认知功能受损。2.脑积水模型大鼠海马组织中GAP-43表达下调,可能是学习记忆的重要分子机制之一。